白藜芦醇对白血病HL-60细胞增殖、自噬和自噬相关基因表达的影响.pdfVIP

白藜芦醇对白血病HL一60细胞增殖、自噬及自噬相关基因表 达的影响 中文摘要 【目的】 中药白藜芦醇(resvemtrol，Res)主要来源于蓼科植物虎杖的根茎提取物，现代 医学研究发现Res具有抗菌消炎、调节免疫、抗衰老、镇咳平喘、降低血液粘稠 度、改善微循环以及抗肿瘤等作用。近年来体内外试验研究均证实白藜芦醇对多 种肿瘤细胞具有抑制作用，是继紫杉醇之后的又一新的绿色抗癌药物。 vacuoles AVs)特异结合，在荧光显微镜下呈现点状绿 收并与自噬囊泡(autophagic 色荧光，是一种定量检查自噬的特异性方法。 1 chain3， 哺乳动物微管相关蛋白一轻链3(Microtubule—associatedproteinli曲t 是自噬相关基因At98在哺乳动物中的同源基因。 本实验应用CCK-8试剂盒、MDC染色、流式细胞术、荧光定量PCR技术， 研究Res对HL．60细胞的增殖、自噬的影响，为白藜芦醇治疗急性髓系白血病 提供理论依据。 【方法】 (1)体外培养HL．60白血病细胞株，取对数生长期的细胞进行实验研究。 (2)CCK．8试剂盒检测不同浓度的Res对HL．60细胞增值的影响。 (3)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Res作用下HL一60细胞的形态。 (4)MDC荧光染色检测Res作用于HL．60细胞后自噬现象的变化。 (5)流式细胞仪分析测定自噬比率。 (6)荧光定量PCR检测不同浓度Res作用于HL．60细胞后自噬相关基因 MAPlLC3A的111][mA的表达。 【结果】 63．73±10．43岬ol／L。随着药物浓度的增加、作用时间的延长，细胞抑制率 明显增加。抑制率呈现出剂量、时间效应关系。 (2)倒置相差显微镜观察结果显示随着Res浓度的增加和作用时间的延长，活 细胞数目越少，细胞透明度和亮度都降低，体积变小，而空白对照组的HL．60 细胞呈增殖生长。 镜下观察，可见自噬囊泡的出现，表明Res可能具有诱导HL．60细胞发生 自噬的作用。 其自噬比率是25．55％，而阴性对照组是4．47％，实验组与对照组比较明显 增高，差异具有统计学意义(PO．01)。 (5)Res作用于HL．60细胞24h后，随着浓度的增加，自噬相关基因 MAPlLC3AmRNA表达逐渐增多，各实验组与对照组相比较，差异具有统 计学意义(PO．01)。 【结论】 (1)Res对白血病细胞系HL．60细胞的增值有明显的抑制作用，并呈现出剂量和 时间效应关系。 (2)Res可诱导HL．60细胞出现自噬现象。 【关键词】 白血病HL．60细胞；白藜芦醇；细胞自噬：MAPlLC3A； 2 Ef．f．ectsofresveratrolon and autophagy prolifbration，autophagy related ofHL一60cells genesexpression Abstract 【Objective】 Resveratrolis extracted舶mtheGiantKnotweedRoot．Itis mainly reponed antibacterial a11tidotale艉ct including antitussiveaIldaIltiasthma blood