白藜芦醇对高糖培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响和NF-κB通路的作用.pdfVIP

中文摘要 白藜芦醇对高糖培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞 增殖的影响及NF．v,B通路的作用 摘 要 为基础的大血管并发症是糖尿病(diabetes 要原因。据统计，糖尿病患者发生动脉粥样硬化的风险较正常人增加3．4 倍。此外，与非糖尿病相比，糖尿病动脉粥样硬化的发病还具有进展快、 范围广等特点。因此，目前已将糖尿病看作是动脉粥样硬化的独立危险因 素。糖尿病可以加速动脉粥样硬化的进展，但其形成的确切机制尚不完全 smoothmuscle 清楚。目前许多研究表明，血管平滑肌细胞(vascular cells， VSMCs)异常增殖在糖尿病动脉粥样硬化发生发展中起着重要作用。 合物，存在于葡萄、花生、虎杖等多种植物中，是植物在受到真菌、细菌 感染或是在恶劣环境下产生的一种抗毒素。研究发现，白藜芦醇除了具有 抗炎、抗衰老、抗氧化应激、抗肿瘤等作用之外，还可以通过抑制血管平 路在血管平滑肌细胞的增殖中发挥着重要作用，但白藜芦醇是否通过抑制 以高糖诱导的血管平滑肌细胞为研究对象，观察白藜芦醇对其增殖活性的 尿病大血管病变的防治提供理论依据。 实验方法： 1．采用细胞培养的方法应用大鼠胸主动脉平滑肌细胞株A7r5(细胞 株购自中国培养物典藏中心)进行研究。将冻存的血管平滑肌细胞株迅速 投入37℃温水中，同时摇动冻存管使快速解冻，解冻后800转／rnin离心5 min，弃上清，加入含20％FBS的DMEM培养基5ml混匀，接种于培养 瓶中，放于37℃、5％C02孵箱中孵育，待细胞铺满瓶底的90％后进行传 代。取处于对数生长期的细胞分别接种于50ml培养瓶和96孔培养板培 中文摘要 养24小时，后更换于无血清DMEM培养基培养24小时，使细胞处于饥 饿状态并同步于G0／Gl期，然后分7组进行实验： ①正常对照组(contr01)·5．5mmol／L葡萄糖 ②高糖培养组(25G)：25mmol／L葡萄糖 9．5mmol／L ③甘露醇高渗对照组(Mannit01)：5．5mmol／L葡萄糖+1 甘露醇 R组(25G+25Res)：25 ④高糖+25 mmol／L葡萄糖+25 Ignol／L白藜 芦醇 R组(25G+50Res)：25 ⑤高糖+50 mmol／L葡萄糖+50lamol／L白藜 芦醇 R组(25G+100Res)·25 ’⑥高糖+100 藜芦醇 mmol／L葡萄糖 ⑦高糖+NF．rd3通路抑制剂组(25G+PDTC)：25 PDTC +30¨mol／L 2．取处于对数生长期的细胞，用MTT法检测不同浓度Res对高糖孵 育下VSMCs增殖活性的影响。 3．取处于对数生长期的细胞，应用流式细胞技术检测不同浓度Res 对高糖孵育下VSMCs细胞周期进程的影响。 4．取处于对数生长期的细胞，应用Westernblot技术检测不同浓度 Res对高糖孵育下VSMCs细胞总NF．rJ3。、cyclinD1蛋白表达情况。 结果： 1．用MTT法检测VSMCs的增殖活性，结果显示在高糖诱导下， (25、50、100 O．05)，且呈剂量依赖性； 2．用流式细胞仪检测细胞各周期的时相分布，结果显示高浓度葡萄 胞周期进程无明显影响；Res(25、50、100 IJmol／