白藜芦醇对糖尿病肾病的保护作用和其机制初探.pdfVIP

白藜芦醇对糖尿病肾病的保护作用及其机制初探 中文摘要 背景在我国，糖尿病肾病(DN)的发病率和患病率呈现出一个明显上升的趋势， 是导致终末期肾脏病(ESRD)的第二位病因，给人民的健康带来了严重的威胁。 但是，目前对于DN的治疗并没有很好的办法，DN仍然具有很高的致死率和致 残率。因此，如何更好地了解DN的发病机制及其病理生理变化，从而更好地防 治DN，就成为了一个亟待解决的问题。目前已有不少的研究提示，血管内皮生 有重要的作用。在动物实验中，使用拮抗VEGF．Flk．1系统的药物也能够很好地 缓解DN的病变。因此，拮抗VEGF．Flk-1系统有可能为DN的治疗带来新的手 段和更好的疗效。但是，另一方面，目前的拮抗VEGF．Flk．1系统药物还存在一 些比较严重的副作用，很难用于临床实践之中。因此，如何研究和开发副作用较 小的抗VEGF-FIk．1系统药物，从而更好地防治DN就显得尤其的重要。白藜芦 醇作为一种天然的植物提取物，其副作用很小，已广泛地用于人类的生活保健之 中。而新近有研究提示，它也有很好的拮抗VEGF的作用，从而应用于肿瘤的 研究之中。而另一方面，已有不少研究表明，白藜芦醇能够通过激活沉默信息调 节子l(SIRTl)，对糖尿病及其并发症具有多方面的保护作用。而近来有研究亦 提示，SIRTl本身也具有很强的抑制VEGF表达的作用。因此，本课题旨在研究 自藜芦醇是否能够通过激活SIRTl，抑制VEGF．Flk-1系统，而缓解DN的病变， 从而为DN的防治提供一个更好的手段。 方法(一)动物实验：对SD大鼠予以单肾切除后，使用链唑霉素造成1型糖 尿病肾病的大鼠模型，随机分成对照组、糖尿病肾病组、以及糖尿病肾病加白藜 芦醇治疗组，8周后收集尿及肾脏标本。(1)检测各组大鼠的体重、血糖、尿白 蛋白排泄率、肌酐清除率、肾重的水平；用过碘酸．雪夫氏染色的方法检测各组 大鼠肾小球的大小、肾小球内基质的沉积水平和用透射电镜检测其肾小球基底膜 的厚度；以及使用免疫组织化学术和Westernblot等方法检测其肾脏纤维化水平， 包括Ⅳ型胶原、纤连蛋白、转化生长因子．13l、结缔组织生长因子、纤溶酶原激 活物抑制剂．1等的表达水平。(2)用免疫组织化学术检测大鼠肾脏中SIRTl的 表达位置，用Westem time PCR检测各组大鼠肾脏内血管生 管生成素．1(Ang．1)的表达水平，用Real 成素-2(Ang．2)的mRNA转录水平。 (二)体外实验：(1)体外培养小鼠肾小球足细胞，分别给予正常糖、高 blot、Realtime 糖、以及高糖加白藜芦醇干预，而后使用Western PCR和ELISA 的方法，检测各组细胞内VEGF表达和分泌的变化；并且通过以慢病毒为载体 的RNA干扰进一步研究SIRTl在其中所起的潜在介导作用。(2)体外培养小鼠 肾小球内皮细胞，分别给予正常糖、高糖、以及高糖加白藜芦醇干预，而后使用 Westem blot、Realtime PCR的方法，检测各组细胞内F瞻1表达的变化；并且 通过以慢病毒为载体的RNA干扰以及转染过表达质粒的方法，进一步研究SIRTl 在其中所起的潜在介导作用。(3)体外培养小鼠肾小球内皮细胞，分成正常对照 组、VEGF刺激组和VEGF加白藜芦醇干预组，使用免疫荧光的方法，观察各组 内皮细胞间细胞连接的变化；并且通过使用一种体外血管通透性试剂盒，进一步 检测各组细胞通透性的变化。 结果(一)动物实验：(1)糖尿病肾病组和白藜芦醇治疗组大鼠的体重和血糖 水平无显著性差异，但较正常组分别有明显的下降和升高；与正常组大鼠相比， 糖尿病肾病大鼠的尿白蛋白排泄率、肌酐清除率、肾重的水平均显著地增加，而 白藜芦醇治疗组则较糖尿病肾病组有明显的下降；糖尿病肾病组大鼠的肾小球直 径、肾小球系膜基质沉积水平、以及肾小球基底膜的厚度均较正常组显著地增加， 而白藜芦醇治疗组则较糖尿病肾病组有明显的下降；在肾脏纤维化方面，糖尿病 肾病组大鼠肾脏内Ⅳ型胶原、纤连蛋白、转化生长因子．131、结缔组织生长因子、 纤溶酶原激活物抑制剂．1等的表达水平均较正常组显著的增加，而白藜芦