白血病细胞株HL-60和K562WWOX基因调节区甲基化水平和基因表达研究.pdfVIP

摘 要 第一部分白血病细胞株儿．60及k562WWOX基因调节区 甲基化水平研究 目的：了解白血病细胞株甩．60及K562包含WW域的氧化还 原酶(WW domain．contaming 。 骗动子区及第一外显子区)的’甲基化水平；探讨WWOX基因调节 ，．区甲基化水平与mRNA表达之间的关系。 ‘_ 一 方法：选取白血病细胞株甩．60及K562细胞做为研究对象，通 ·。过对咖x基因‘DNA提取，使用Ez DNA修饰试剂盒进行亚硫酸盐修饰后，采用甲基化特异性PCR (MSP)法检测WWOX基因启动子区及第一外显子区甲基化情况； 亚硫酸盐修饰测序法(BSP)检测WWOX基因启动子区CpG位点甲 基化情况。提取细胞总砌妊，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反 基因调节区甲基化水平与mRNA表达之间的关系。 结果： 1．肌．60细胞WWOX基因启动子及第一外显子区MsP非甲基化 引物扩增出阳性条带，甲基化引物扩增阴性；亚硫酸盐修饰测序法显 示启动子区无甲基化CpG位点。 条带，非甲基化引物扩增阴性；亚硫酸盐修饰测序法显示启动子区有 阴性，非甲基化引物扩增出阳性条带。 有统计学意义妒0．05)。 结论： 区无甲基化，K562细胞调节区存在甲基化。 区无甲基化的m一60细胞其mRNA表达明显降低，提示D】怕甲基 化可能是导致K562细胞WWOX基因mRNA表达降低的重要原因。 关键词：WWOX，m．60，K562，DNA甲基化 Il 基因甲基化水平及基因表达的影响 目的：探讨去甲基化药物1一(p棚．呋喃核糖苷)．1，2．二氢嘧啶．2． WWOX甲基化水平及基因表达的变化，分析Zeb在白血病治疗中的 意义。 方法：去甲基化药物Zeb处理甩．60及K562细胞，以5．氮杂一2 基因启动子及第一外显子甲基化状态，亚硫酸盐修饰测序法检测启动 子区甲基化情况；QRT-PCR检测WWOX基因m砌妊的表达情况， 理组与处理前组甲基化情况与mRNA表达及蛋白表达之间的关系。 结果： 出阳性条带，非甲基化扩增阴性；第一外显子甲基化PCR扩增阴性， 而非甲基化PCR扩增出阳性条带；药物处理后启动子及第一外显子 甲基化PCR均不能扩增出阳性条带，而非甲基化扩增阳性；BSP法 检测药物处理后K562细胞启动子甲基化情况显示有1个(2．9％)甲 基化位点，与处理前28_(82．4％)个甲基化位点比较差异具有统计学 意义俨O．01)。 2． 子及第一外显子甲基化PCR扩增均阴性，非甲基化均扩增出阳性条 带。 3． 及蛋白的表达均升高，处理前后比较差异有统计学意义俨O．05)，不 同浓度的Zeb处理组间比较差异有统计学意义∽O．05)，而不同浓度 5．Aza．CdR处理组间比较差异无统计学意义(PO．05)。 4． 及蛋白的表达差异无统计学意义(P0．05)。 结论： mRNA和蛋白表达无明显影响。 关键词：折布拉林，地西他滨，WW0x，K562，DNA甲基化 ABSTRACT WWOXGene PartI ofthe ofthe regions Study regulatory K562 ofHL·60and inleukemiaceUlines methylation and the