百日咳毒素对裸鼠子宫内膜癌移植瘤的抑制影响.pdfVIP

摘要 百日咳毒素对裸鼠子宫内膜癌移植瘤的抑制作用 研究生 胡冬梅 导师 乔玉环 郑州大学第一附属医院妇产科 河南 郑州450052 摘要 研究背景与目的 子宫内膜癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，近年来其发病率呈上升趋 势，严重威胁女性健康。无孕激素拮抗的高雌激素长期刺激可增加患病风险。 研究发现，雌激素除通过传统的“基因转录效应”发挥作用，还有“非基因转 录效应’’。研究表明，雌激素可激活子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激 导“非基因转录效应”最可能的候选分子。我们前期研究提示，子宫内膜癌中 雌激素对P13K／AKT信号通路活化极有可能是由G蛋白偶联雌激素受体(GPER) 介导。百日咳毒素(Pertussistoxin，PTX)是百日咳杆菌产生的一种毒力蛋白， 抑制G蛋白介导的相关通路。国内外关于PTX阻断GPER及其介导的AKT信 号通路的研究，报道极少，本实验通过建立裸鼠子宫内膜癌移植瘤模型，观察 G蛋白偶联受体抑制剂百日咳毒素(PTX)对子宫内膜癌移植瘤的细胞凋亡及 对磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B(P13K／AKT)信号传导通路中磷酸化蛋白激酶 路来治疗子宫内膜癌的可能性。 方法 1．静置贴壁法体外培养人子宫内膜癌HEC．1A、Ishikawa细胞系。 l 摘要 2．建立裸鼠子宫内膜癌移植瘤模型以及实验分组和给药，无特定病原体 free，SPF)级环境下饲养裸鼠，裸鼠购回后适应性生长3 (specific．pathogen 悬液，无菌条件下接种于裸鼠右背部皮下，O．2ml／只(约含2．4×106个细胞)，接 种瘤细胞后将裸鼠在原条件下饲养，每天观察其精神、活动、饮食、排便等状况。 细胞接种7天后，可见裸鼠背部结节状肿瘤生长，以最长径达5mm为成瘤阳性 腹腔注射PTX(250ng／只)，每周2次，共4周，对照组腹腔注射同体积生理盐 水建立裸鼠子宫内膜癌移植瘤模型、测量裸鼠体重及瘤体大小。 3．HE染色光学显微镜下观察移植瘤组织的病理学特点，原位末端标记法 (TUNEL)检测移植瘤组织中凋亡细胞，计算凋亡指数(舢)，比较实验组与 对照组的凋亡情况。 4．免疫组织化学SP法观察阳性细胞数和染色强度并记分进行半定量分析 检测P．AKT的表达情况。 5．统计学方法，采用SPSS17．0软件分析，方差齐性检验、t检验、等级资料 秩和检验等，a--0．05为检验水准，P0．05为差异有统计学意义。 结果 为38．74％、33．21％。 2．HE染色显示，与对照组相比实验组细胞异型性、核浆比相对较小； 10．69，P0．05；HEC一1A，，=一11．16，P0．05)。 3．免疫组织化学结果显示，p-AKT主要在胞浆表达，对照组肿瘤组织中 表达较高，黄色颗粒着色较深，呈棕褐色，且阳性细胞数较多。用药组棕黄色 颗粒染色较对照组明显减弱、变浅，阳性细胞数少，提示p-AKT表达降低： 四组均无阴性表达，HEC．1A对照组(+)1例、(++)2例，(+++)4例，实 摘要 (++)、 (+++)各3例，实验组(+)5例，(+++)各1例，采用等级资料 的秩和检验，HEC．1A实验组与对照组比较差异有统计学意义(贮=9．50， 结论 瘤的生长，促进其凋亡。 关键词：子宫内膜癌；裸鼠；HEC．1A；Ishikawa；百日咳毒素；磷脂酰肌醇 3激酶／蛋白激酶B信号传导通路 Abs仃act Inhibitioneffectof toxinonsubcutaneoushuman pertussis endometrialcarcinoma in