磁珠分选半相合基因鼠效应细胞免疫治疗黑色素瘤的探究.pdf

lIil1 1 1 llll ll II UllIIl 6 Y278607 目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………4 英文缩写………………………………………………………………………8 研究论文 磁珠分选半相合基因鼠效应细胞免疫治疗黑色素瘤的研究 前言…………………．…………………………………………………9日U舌…………………．…………………………………………………9 材料与方法…………………………………………………………．．1l 结果…………………………………………………………………19 附图…………………………………………………………………22 附表…………………………………………………………………．．28 讨论…………………………………………………………………．．30 结{仑……………………………………………………………………34 参考文献………………………………………………………………35 综述过继输注半相合基因免疫细胞在实体肿瘤治疗中的应用………．38 致谢…………………………………………………………………………．47 个人简历……………………………………………………………………48 万方数据 中文摘要 磁珠分选半相合基因鼠效应细胞免疫治疗黑色素瘤的研究 摘 要 目的：本实验以黑色素瘤B16细胞接种于C57BL／6雌鼠背部，建 立小鼠黑色素瘤模型。体外应用C57BL／6鼠及半相合基因鼠CB6Fl 肿瘤全抗原与半相合效应性淋巴细胞共培养，随后检测效应细胞体外杀 伤黑色素瘤效应。然后经过磁珠分选纯化后富集分泌IFN—Y的半相合效应 细胞，将其作用于荷瘤C57BL／6雌鼠体内，检测纯化后的半相合效应细 胞对肿瘤微环境中炎性因子IL．2及IFN—Y的影响，观察各组小鼠肿瘤体 积变化，生存期，GVHD程度，为肿瘤微环境干扰介导的细胞免疫治疗 技术在临床的应用提供新的理论依据和实验数据。 方法： 1体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞，建立C57BL／6小鼠黑色素瘤模 型。 2 熟DC(maturedDC，mDC)。 3磁珠分选效应性T细胞的制备：将CB6F1小鼠脾细胞，经淋巴分 离液分离获得淋巴细胞，尼龙毛柱吸附法收集T淋巴细胞。培养T淋巴 细胞2天后，加入肿瘤抗原致敏的成熟DC，混合培养3-4天，即可获得 肿瘤抗原刺激后的活化效应性T细胞。应用磁珠阳性分选方法富集上述 活化半相合基因效应T细胞中分泌IFN吖的半相合效应细胞。 4 生的CTL(作为效应细胞，E)分别与小鼠黑色素瘤B16细胞(作为靶细胞， h，加入CCK．8 T、)按E：T=50：1、20：1和1O：1的比例混合后孵育24 试剂(20此／孔)，酶标仪检测各孔450nm波长的A值，并计算效应性T 细胞对肿瘤细胞的杀伤率。 万方数据 中文摘要 5实验动物分组及治疗：将荷瘤小鼠C57BL／6完全随机分至3组， 每组40只。 (A组)荷瘤对照组：每只荷瘤小鼠鼠尾静脉注射O．2ml生 理盐水； 环磷酰胺； (C组)磁珠分选纯化半相合CTL治疗组：每只荷瘤小鼠鼠 源效应性T细胞。观察治疗后各组荷瘤鼠肿瘤体积变化及生存期。 6分别在细胞治疗后的第1、4、7、lO、14天取小鼠的血清，采用 同治疗方法对荷瘤鼠外周血中两细胞因子产生的影响。 7磁珠分选纯化效应细胞治疗后第14天，HE