从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位.PDFVIP

第 24 卷第 11 期 第 　三 　军 　医 　大 　学 　学 　报 Vol. 24 , No. 11 　　　　 　　　　 1332 2002 年 11 月 ACTA 　ACADEMIAE 　MEDICINAE 　MILITARIS 　TERTIAE Nov. 2002 ( ) 论著 　　　 文章编号 2002 从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白 A 亚单位 ( ) 王缚鲲 ,邹全明 ,张卫军 , 田文标,杨王君 ,郭学青 ,郭 　红 　　第三军医大学医学检验系临床微生物学教研室 ,重庆 400038 　　提 　要 : 目的 　建立一种有效的从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白 A 亚单位 HspA 的方法。方法 　重组基因工程 大肠杆菌发酵后 ,表达的 Hp 的 HspA 包涵体经洗涤、变性、复性 ,采用 Q Sepharose High Performance 阴离子交换层析和 Superdex 75 凝 胶过滤层析分离纯化。使用 SDSPAGE 和 HPLC 检测纯度 ,选用 ELISA 和动物实验对纯化蛋白的免疫学活性和生物学活性进行鉴 定。结果 　Hp 的 HspA 包涵体经洗涤和溶解后 ,Hp 的 HspA 的纯度 60 % 。包涵体溶解液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析后纯 度超过 95 % 。Hp 的 HspA 纯品经检测具有良好的免疫学活性和生物学活性。结论 　本研究建立的分离纯化方法可从包涵体中获 得高纯度的重组 HspA 蛋白 ,为进一步的动物实验研究奠定了基础。 　　关键词 : 幽门螺杆菌 ;热休克蛋白 ;包涵体 ;蛋白纯化 　　中图法分类号 : R341 ;R377 ;R394. 3 　　　 文献标识码 : A High purification of recombinant Helicobacter pylori heats shock protein A from inclu sion body WANG Fukun , ZOU Quanming , ZHANG Weijun , TIAN Wenbiao , YANGJun , GUO Xueqing , GUO Hong (Department of Clinical Microbiology , Third Military Medical University , Chongqing 400038 , China) 　　Abstract : Objective 　To establish an effective method for obtaining recombinant Helicobacter pylori heat shock protein A ( HspA of Hp) with biological activities from inclusion bodies of E. coli . Methods 　The inclusion bodies of HspA expressed in E. coli were washed , denatured and