诺贝尔奖得主山中伸弥论文翻译.docVIP

摘要 已分化的细胞能通过将核物质转移入卵母细胞或与胚胎干细胞融合而重编程至胚胎细胞样状态。我们对诱导这种重编程过程的因子知之甚少。在这里，我阐述了通过四个因子，Oct3/4, Sox2, c-Myc,and Klf4，在胚胎干细胞培养条件下将鼠胚胎或成体纤维母细胞向多能干细胞的诱导。出乎意料的是，Nanog不是必须的。这些细胞被我们称为诱导多能干细胞(inducedpluripotent stem cell,iPS cell)，它们表现出胚胎干细胞(embryonicstem cell,ES cell)的形态和属性，并且表达胚胎干细胞的标记基因。将iPS cells皮下注射转移至裸鼠导致包含所有三个胚层的一系列组织的肿瘤的形成。接下来将其注射进入鼠囊胚，iPS cells导致了鼠胚胎的发育。这些数据证明，多潜能干细胞能通过仅仅添加一些确定的因子而从纤维母细胞培养物中直接生成。 简介 起源于哺乳动物囊胚内细胞团的胚胎干细胞维持在多潜能性时具有无限生长的能力，并且能分化成三个胚层内的的所有细胞( Evans and Kaufman, 1981; Martin, 1981)。人类胚胎干细胞被认为能治疗许多疾病，例如Parkinson’s disease，spinal cordinjury, and diabetes (Thomson et al., 1998 )。尽管如此，就像病人移植后组织排斥反应的问题一样，人类胚胎的使用面临着巨大的伦理困难。避免这些问题的唯一途径是从病人自体细胞直接生成多潜能细胞。 体细胞能够通过将核物质转移进卵母细胞( Wilmut et al., 1997)或与胚胎干细胞融合(Cowanet al., 2005; Tada et al., 2001 )而重新编程。这表明未受精的卵子和胚胎干细胞含有能授予体细胞生物全能性或多潜能性的因子。我们假设这些因子在维持胚胎干细胞的特性方面起重要作用，在体细胞多潜能性的诱导中也起关键作用。 数个转录因子，包括Oct3/4 (Nichols et al., 1998; Niwa et al., 2000), Sox2 ( Avilion etal., 2003),and Nanog ( Chambers et al., 2003; Mitsui et al., 2003)，对早期胚胎和胚胎干细胞多能性的维持有作用。一些在肿瘤组织中经常表达上升的基因，如Stat3 (Matsuda et al.,1999; Niwa et al., 1998 ), E-Ras ( Takahashiet al., 2003),c- myc ( Cartwright et al., 2005), Klf4 ( Li et al., 2005), and b-catenin (Kielman et al., 2002; Sato et al., 2004)，已被显示能使胚胎干细胞表型长效维持，并在培养中使胚胎干细胞快速繁殖。此外，我们还鉴定了其他数个在ES细胞上特异表达的基因( Maruyama etal., 2005; Mitsui et al., 2003)。 在这个试验中，我们检查了是否这些因子能在体细胞中诱导多潜能性。通过结合四个被挑选出来的因子，我们能从鼠胚胎或成体纤维母细胞培养物中直接产生多潜能细胞，我们称之为诱导多能干(iPS)细胞。 结果 我们假设一些因子在胚胎干细胞特性的维持中起重要作用(see Table S1 in the Supplemental Data available with this articleonline)，基于此假设，我们选择24个基因作为诱导体细胞多潜能性的因子的候选基因。对于b -catenin, c-Myc, and Stat3，我们用了活性的形态，S33Y- b-catenin (Sadot et al., 2002 ), T58A-c-Myc ( Chang et al.,2000 ), and Stat3-C ( Bromberg et al., 1999)，respectively。因为先前已报道的Grb2在多潜能干细胞中的负性作用(Burdon et al., 1999; Cheng et al., 1998)，我们诱导了它的dominant-negative突变体Grb2 #SH2(Miyamoto et al., 2004)作为24个候选基因之一。 为了对这24个候选基因进行评估，我们发展了一套检测系统，在这个系统里面，多潜能状态的诱导可以作为G418的抵抗被检测出来( Figure 1A)。我们通过同源重组插入了一个βgeo cassette (β-半乳糖胺酶和新霉素抗性基因的混合物)到鼠Fbx15基因中( Tokuzawa e