SSR分子标记实验操作注意事项.pdfVIP

第30卷第11期2011年11月 种子(Seed) V01．30No．11Nov．2011 ·经验交流· SSR分子标记实验操作注意事项 戴剑，吴燕 (江苏省农业科学院粮食作物研究所，南京210014) ofSSRMolecularMarkerin Attention Experiment DAI Jian．W可Yan 摘要：SSR分子标记已经得到普遍应用，初学者如不能很好地 掌握实验操作要点，就难以在较短时间内成功地获得试验结 均需要注意以下常见的操作事项I 果。本文分别介绍了DNA提取、PCR扩增和电泳检测PCR扩 增产物等实验过程中容易被忽视的注意事项，以期为普及SSR DNA的污染。使用冷冻干燥叶片法，可以将每个样品 分子标记实验技术服务。 在单独的离心管中研磨，研磨使用的小钢珠球最好是 关键词：SSR；DNA提取；PCR扩增；电泳；注意事项 一次性的，如果是反复使用的小钢珠球，必须彻底清洗 中图分类号：S131+．2 文献标志码：B 干净。使用液氮和研钵研磨叶片组织时，必须在每次 文章编号1 1001—4705(2011)11-0122-02 研磨前彻底清理干净研钵和研磨棒。 SSR(SimpleSequenceRepeats)又称微卫星DNA， (2)试验材料应选取幼嫩组织，因为植物幼嫩组 是一类由几个(多为1～6个)碱基组成的基序(motif) 织DNA含量高，且多糖、多酚含量少。 串联重复而成的DNA序列，其长度一般较短，它们广 (3)装入离心管的叶片组织最好不要超过离心管 泛分布于整个基因组的不同位置上，每个座位上重复 单位的数目及重复单位的序列都可能不完全相同，因 产量和纯度下降。 而造成了每个座位上的多态性¨J。SSR标记数量丰 (4)使用液氮研磨时，要先将研钵用液氮冷却，在 富，覆盖整个基因组，而且分布均匀，多态性高，呈共显 加入液氮后，要先将叶片压碎，研磨时要快速用力，尽 性遗传，重复性好，操作简便，是一种理想的分子标记 量使样品磨成粉末状。 技术，被广泛应用于构建基因连锁图、分子辅助育种、 (5)水浴前需要确保试管盖盖严，或使用辅助工 品种鉴定、遗传资源的保存等方面。然而，对于初学 具进行加固，以防止水浴时因温度较高导致试管盖 者，由于不能较好地掌握实验操作技能和注意事项，往 开裂。 往不能一次获得试验的成功，需要经过多次反复的试 (6)水浴过程中，每隔10～15min将离心管取出 验才能达到预期的结果，这样不仅耽误了试验时间，而 振荡、摇匀，使粉碎的叶片组织尽量与裂解液充分接 且浪费了大量昂贵的分子实验试剂。然而，大多数文 触，破坏细胞结构，释放DNA。 献仅着重分析试验的结果，只是简单地介绍试验方法， (7)实验过程中振荡动作不宜剧烈，移液枪头最 甚至会省略试验方法，因此，作者根据多年的实践经 好使用大孔枪头，移液动作不能太快，以免使DNA 验，对SSR分子实验中的一些容易被忽视的注意事项 断裂。 加以总结，以期能给初学者提供借鉴。 1 DNA提取过程中的注意事项