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温少I1医学院硕士学位论文 七氟烷急性暴露对TM3细胞的影响及机制研究 中文摘要 目的 通过小鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)急性暴露在固定浓度的七氟烷中， 七氟烷对小鼠睾丸间质细胞的影响：并通过基因芯片和生物信息学来筛选差异基 因及染色体定位和功能分析进行机制研究。 方法 选用TM3细胞株，稳定传代培养后，分为三组：对照组、2％七氟烷组、5％ 七氟烷组，每组分别暴露2h，4h，6h，后行形态学观察和CCK．8检测，并采用 免疫蛋白印迹(Western Genel．0 ST芯片 的蛋白质含量，收集5％七氟烷暴露6h的细胞应用Affymetrix 筛选差异基因；应用生物信息学对差异基因进行染色体定位和功能分析。 结果 1，形态学改变 2％七氟烷组在各时间点的细胞较对照组在形态学上无明显变化，5％七氟烷组 细胞形态学较对照组示生长状态受损，活力降低，并且随干预时间延长，变化越 显著。 2、CCK-8检测 对照组和2％七氟烷组、5％七氟烷组的各组间2h、4h、6h显示无差异(历0．05)， 在2h、4h干预后，2％七氟烷和5％七氟烷组较对照组无差异(乃O．05)，在6h干 预后，2％七氟烷组较对照组无差异，而5％七氟烷组较对照组差异明显(P(O．05)。 3、PCNA／Caspase．3／Bcl．2蛋白质表达情况 采用免疫蛋白印迹法(Western Blot)测定对照组、2％和5％七氟烷组样品中 在各组中都有表达，但2％七氟烷组和5％七氟烷组的蛋白含量较对照组，差异无 统计学意义(乃0．05)o 4、基因芯片 5％七氟烷组6h后的细胞较对照组出现差异表达的基因有45个，其中上调基 因38个，下调基因7个，差异倍数最大可达4．96，差异较大的基因有Ptgs2、 Ccl2、Duspl。基因功能分析显示，上调基因大部分属于三磷酸腺苷粘合基因 (18．4％)，其次为金属离子粘合基因(10．5％)、趋化因子活性和细胞因子活性相 温州医学院硕士学位论文 关基因(10．5％)、生长因子活性基因(7．9％)。这些差异基因随机分布在大多数 染色体上，主要分布在1、11号染色体上，各包含6个基因(22．7％)，其次是5、 6、9、17号染色体，各包含4个(10．8％) 结论 2％七氟烷急性暴露对Leydig细胞无明显影响，但5％七氟烷急性暴露会使 Leydig细胞生长受损，活力降低，且随时间增加影响越大。其作用机制上三磷 酸腺苷粘合基因、金属离子粘合基因、趋化因子活性和细胞因子活性相关基因、 生长因子活性基因这些差异表达可能在其中发挥重要作用，其差异在染色体上 定位可能主要集中在1、11号染色体上，但确切机制仍需要进一步深入研究。 [关键字]七氟烷；睾丸间质细胞；凋亡；基因表达；染色体定位 6 温州医学院硕士学位论文 ofsevofluraneonTM3 cells EffectandMechanism Leydig Abstract Objective the to2％and5％sevoflurane Tomeasureeffectofmouse cell leydigexposed andcell kit-8 thelevelsof examiningmorphologycountingtest，determing through