人毛囊体外保存的实验探究.pdfVIP

目 录 中文摘要·························································1 英文摘要·························································2 前言·····························································4日Ⅱ舌 。‘。‘。‘‘‘‘。‘‘‘‘。‘。。。。。。‘。。。‘。。。。。。。。。。。。。‘。‘‘。。。‘。。。。。。。。。。。。。4 第一章优化玻璃化冷冻保护剂体外冻存人毛囊的实验研究·············6 第一节 人完整毛囊的体外培养··································6 第二节 玻璃化冻存和慢速冻存法体外保存人毛囊·················14 第三节 优化玻璃化冷冻保护剂冻存人毛囊·······················22 第二章利用组织工程皮肤体外保存人毛囊的实验研究················30 第一节 组织工程皮肤的体外构建·······························30 第二节 应用组织工程皮肤体外保存毛囊·························36 全文总结························································44 论文参考文献····················································45 综述····························································50 综述参考文献····················································54 英文缩略词表····················································59 致谢····························································60 近年发表文章及科研情况··········································61 独创性声明······················································62 中文摘要 研究背景： 毛囊的体外保存对于临床毛发移植具有重要意义，很多学者利用低温以及玻璃 化深低温冻存等各种不同方法体外保存人完整毛囊，但效果均不理想，研发更有效 的玻璃化冷冻保护剂是解决问题的关键。另外，毛囊再生与皮肤微环境具有复杂而 密切的联系，组织工程皮肤在一定程度上模拟了毛囊生长环境，本研究首次尝试利 用组织工程技术在体外常温保存毛囊。 目的： 1．添加促进毛囊再生的相关生长因子，优化玻璃化冷冻保护剂。 2．组织工程技术模拟毛囊的生长环境，探讨常温保存毛囊方法。 方法： 1．将临床取得的健康头皮分离为单个无损伤毛囊后，随机分为体外培养组、慢速冻 存组、玻璃化冻存组和细胞因子玻璃化冻存组。分别冻存24小时，72小时，1个 月，6个月。通过长度测量、HE染色和免疫荧光染色检测毛囊活性。 2．将分离的毛囊单位插入由成纤维细胞和I型鼠尾胶原构建的组织工程真皮后，分 3次铺入角质形成细胞，浸没培养1周、气一液界面培养3周后，通过镜下观察、 HE染色和免疫组化检测组织工程皮肤和毛囊的生长状态。 结果： 1．经过不同时间冻存后复温，细胞因子HGF玻璃化冻存组毛囊5天内生长率和生 长长度高于其他冻存组，与体外培养组无统计学差异；HE染色结果显示该组毛囊 细胞数量多于其他冻存组，且组织结构更完整；免疫荧光染色显示该组毛囊的干细 胞存活数量明显多于慢速冻存组和未加因子玻璃化冻存组。 2．经过4周体外培养，植入毛囊的组织工程皮肤镜下观察可见毛囊和皮脂腺等皮肤 附属器存在，毛囊形态维持21天未见毛乳头损坏，该时间明显长于体外悬浮培养。 HE染色显示植入毛囊的组织工程皮肤表面可见分层角化的表皮形成，免疫组化染 1 色显示其分化标志物Keratin4和Keratin0表达阳性，表皮真皮连接处基底膜特