云南玛咖抗氧化活性分析.docVIP

云南栽培玛咖Sandoval等[用ONOO-、DPPH、H2O21 材料与方法 1.1 材料与试剂 根据表皮颜色，分别采集种植于云南省乌蒙山区4个不同海拔、3025m)的白色、黄色及紫色3个类型的玛咖块根自然晒干后粉碎过60目4℃下冷藏备用。 二苯代苦味肼基自由基(DPPH)、三吡啶三吖嗪(tripyridyl-triazine, TPTZ) Sigma公司产品，其余为国产分析纯。 1.2 仪器与设备 DU800紫外可见分光光度计美国贝克曼公司。1.3 方法 1.3.1 玛咖提取液的制备 称取各粉碎后的玛咖样品20g加入75%(V/V)乙醇200m,室温下超声提取30min,过滤后滤渣再加200m 75%乙醇提取，共提取次，合并滤液后减压浓缩，75%乙醇定容到100m，0.45μm滤膜过滤后备用。 Ferric reducing/antioxidant power，FRAP法)。FRAP 试剂10mmol/L的TPTZ(用40mmol/L 盐酸溶解)，20mmol/L的FeCl3·6H2O和pH 3.6的乙酸缓冲液以11:10的体积比混匀,在37 ℃下保温备用。 标准曲线的绘制分别吸取0.1mL不同浓度的FeSO4溶液，各加入3.9mL FRAP试剂，混匀后37℃下反应10min,测定593nm下吸光。以吸光度为纵坐标FeSO4浓度为横坐标绘制标准曲线。 样品测定：0.1mL样品中加入3.9mL FRAP试剂，混匀后37℃反应10min593nm下测定吸光，以去离子水作为空白对照样品还原能力以达到同样吸光度所需的FeSO4的浓度表示。 1.3.3 玛咖乙醇提取物清除DPPH自由基0.4mmol/L DPPH乙醇溶液3.9mL与不同体积(100μL)的样品混和75 %乙醇补充至4.0mL充分混和后在暗处静置30min517nm处测定其吸光度清除率计算公式为：清除率％=[A0 (Ai － Aj)]／A0 ×100，式中Ai样品与DPPH反应后体系的吸光度；Aj样品本身吸光度(以3.9mL乙醇替代DPPH)；A0为未加样品空白值(以0.1mL 75%乙醇替代样品)的吸光度。 1.3.4 玛咖乙醇提取物清除·OH自由基能力测定 采用Fenton反应体系。10mL试管中依次加入0.5mL 9mmol／L FeSO40.5mL 9mmol/L水杨酸-乙醇溶液及不同体积样品溶液(50200μL)，0.01 mol/L磷酸缓冲溶液(pH7.4)补充至5mL最后加0.5mL 8.8mmol／L H2O2启动反应，37℃水浴反应30 min，在510nm 下测量各浓度的吸光度。清除率计算公式为：·OH清除率％=[A0 (Ai － Aj)]／A0 ×100 式中，A0为未加样品(以75%乙醇代替样品)的空白对照液吸光度；Ai为加入玛咖提取液后反应体系的吸光度；Aj为不加H2O2的玛咖提取液(以蒸馏水代替H2O2)本底的吸光度。 1(O2-·)能力测定 采用邻苯三酚自氧化法测定玛咖提取物的清除O2-·活性，邻苯三酚在碱性条件下自氧化形成O2-·，生成有色中间产物，当有抑制剂存在时，可清除O2-·，从而阻止中间产物的积累，由此可通过比色法检验物质清除O2-·的能力。具体方法为：0.05mol/L Tis-HC1缓冲液(pH 8.0，含1 ml／L EDTA)4.5 mL中加入不同体积(40～200μL)样品溶液，75 %乙醇补充至4.6mL，混匀后置于25℃水浴中预热20min，再加入0.2mL 6mmol／L邻苯三酚溶液(以10mmol／L HCl配制)，迅速混匀并计时，以10mmol/L HCL为参比，325nm处每隔30s测定反应体系的吸光度，共记录前4min，计算吸光度值随时间的变化值(邻苯三酚自氧化速率)。清除率计算公式为：O2-·抑制率/％=(1－样品自氧化速率/空白自氧化速率) ×100 1.4 数据处理 3次重复，数据处理采用excel 2003处理，结果采用表示。 2. 结果与分析 2.1 玛咖乙醇提取物总还原能力 总还原力FRAP值越大表明抗氧化剂的还原能力越强抗氧化活性越高。由图FRAP值可，除2790m海拔处黄色玛咖提取物还原力略高于紫色外其余海拔下玛提取物的还原能力均为紫色黄色白色 图1玛咖提取物铁离子还原/抗氧化能力 2.2玛咖乙醇提取物清除DPPH自由基能力 DPPH方法操作简便且灵敏度高，在天然抗氧化物研究中应用较为普遍。由表试验结果可知，玛咖提取物清除DPPH自由基的能力，清除随的增加而增，具有一定量效关系。白色玛咖提取物对DPPH自由基清除率大于80%μL(1976m)、60μL(2388m和27900m)及40μL(3025m)；黄色、紫色玛咖提取物对DPPH自由基清除率大于80%μL(1