创新实验设计-小麦磷高效基因TaPHR1的遗传.docVIP

生物技术实验设计方案 题 目：小麦磷高效基因TaPHR1的遗传 转化研究及转基因后代鉴定 院（系）： 农学院 专业： 班级： 姓名： 学号： 成绩： 完成日期： 2015.06.14 一、立论依据 1.项目的研究意义 小麦是世界上种植面积最广的粮食作物，也是我国最重要的粮食作物之一，其产量的高低和品质的好坏影响到我国国民经济发展水平的高低。因而，小麦品质的遗传改良一直受到广泛的重视。由于传统的育种方式难以满足现代社会中人们对小麦产量和品质的需求，因此采用基因工程技术将控制优良性状的基因导入小麦品种，是近年来发展起来的新的品种改良方法。经过十多年的研究与探索，多种外源基因转化技术在小麦上应用并获得了成功，在提高小麦抗病虫害能力、抗逆性、改善品质和雄性不育利用等方面展现出了良好的应用前景。 转基因技术是指用人工方法将外源基因或DNA导入受体生物细胞中，稳定地整合、表达并遗传的技术。自从1992年Vasil等利用基因枪法获得第一例转基因小麦以来，各国研究人员利用多种遗传转化技术，将不同目的基因导入小麦，得到了转基因植株。而随着人们对农杆菌转化系统认识的深入及农杆菌介导技术在小麦遗传转化上优势的凸现，农杆菌介导法已逐渐开始取代基因枪法，成为人们进行小麦转基因研究的主要方法。磷是植物正常生长发育必需的营养元素，它不仅是植物体内核酸、核蛋白、磷脂等多种重要化合物的组分，而且以多种方式参与植物体内的生理过程，在碳水化合物、氮素、 脂肪代谢，细胞的能量转换、呼吸和光合等代谢活动中都具有重要作用充足的磷营养促进植物的生长发育，提高植物抵御旱、寒和盐碱等胁迫的能力小麦是我国重要的粮食作物之一，大多数小麦品种对磷肥的利用率仅为%-26%。我国冬小麦主产区大多分布在缺磷的石灰性土壤上，土壤有效磷小麦生产的主要限制因素之一。因此，进行小麦高效，对于提高小麦对土壤磷和磷肥的利用效率具有十分重要的意义 1. 研究目标（拟解决的关键问题） 1.1小麦最优组织培养条件的研究：以MB培养基为基本培养基，研究不同浓度的2,4-D、 KT、IAA及NAA对小麦再生体系的影响。 1.2农杆菌介导小麦遗传转化体系的建立：对影响转化效率的因素,如农杆菌浓度及浸染时间等进行研究，以提高农杆菌转化小麦的效率。 1.3转基因植株的获得：在研究并建立遗传转化体系的基础上，将磷高效基因TaPHR1转入小麦体内，获得转基因植株。 1.4转基因小麦植株后代的PCR鉴定。 2.研究内容（限400字） 2.1组织培养：小麦成熟胚诱导产生胚性愈伤组织。 2.2农杆菌侵染：用农杆菌菌液浸染小麦愈伤组织，以找出最佳的菌液浸染浓度和时间，然后共培养3天。 2.3获得植株：洗菌后加入抗生素筛选，然后分化成苗。 2.4转基因植株的检测：提取基因组DNA进行PCR检测。 3.拟采取的步骤及技术路线 3.1本课题的研究步骤 收取小麦种子； 种子表面消毒； 诱导胚性愈伤组织； 菌液侵染； 共培养； 洗菌及抗生素筛选； 分化成苗，炼苗并得到再生植株； DNA提取及PCR检测：提取基因组DNA进行PCR检测。 3.2技术路线及研究方案 收取小麦种子→种子表面消毒 →诱导胚性愈伤组织 →菌液侵染 →共培养 →洗菌→抗生素筛选 →分化成苗 →炼苗并得到再生植株 → DNA提取 →PCR检测。 4.项目预期成果 完善农杆菌介导的小麦遗传转化体系，利用本实验室构建的磷高效基因表达载体pTaPHR1进行遗传转化，将小麦磷高效基因TaPHR1转入小麦中，并对转基因后代进行分析鉴定，获得磷高效转基因后代。 参考文献: [1]陈立国, 后猛等.农杆菌介导小麦成熟胚遗传转化研究[J].麦类作物学报,2007,27(2):188–193. [2]刘万代,尹钧等.转基因技术在小麦遗传改良中的应用[J].中国农学通报, 2006, 22:(7):69–73. [3]柳建军,于洪欣等.小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化的研究[J].山东农业大学学报,1996, 27(4):451–456. [4]蔡润,中田和男等.小麦根愈伤组织胚胎发育过程研究[J].西北植物学报, 2000, 20(1): 48–53. [5]陈淑仪，运用PCR技术鉴定转基因玉米PCR技术快速检测马铃薯环腐病菌. 中国马铃薯，第20卷，第4期，2006 [7]柯遐义,陈春洪等.影响麦成熟胚培养的几种因素研究[J].广东农业科学,1995, 6:12–14. [8]刘庆法,唐克轩等.农杆菌介导的小麦遗传转化条件的研究[J].复旦学报(自然科学版),1998, 37(4):569–572. [9] 张 平 左示敏 李爱宏 张亚芳 陈宗祥 潘学彪等. 提高农杆菌转化水稻频率几个因素的研究. 中国水稻科学(Chinese J Rice S