丙酮酸氧化酶速率法在献血员ALT筛查中应用评价.docVIP

丙酮酸氧化酶速率法在献血员ALT筛查中应用评价【中图分类号】R446.1 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2011）02-0136-01 【摘要】目的：丙酮酸氧化酶速率法应用于献血员ALT筛查。方法：利用氧化酶丙酮酸生成过氧化氢，过氧化氢与2，4，6三溴-3-羟基笨甲酸和4-氨基比林在过氧化物酶作用下生成红色醌类化合物的原理。结果：该方法线性范围大，灵敏度高，结果准确，重复性好，抗干扰能力强等优点，适合血站大批量标本的检测。 【关键词】丙酮酸氧化酶；献血员；ALT 1 材料和方法 1.1 仪器： 1.1.1 材料和方法 1.1.2 仪器：酶标仪MK3（芬兰丹尼仪器公司）；实验室软件Itswell由烟台海参威科技有限公司提供； 1.2 试剂：北京瑞华倍肯医学制剂有限公司（批号：HP90513） 1.3 校准血清由江西瑞华倍肯医学制剂有限公司（批号：HP90201） 1.4 反应原理： L-丙氨酸+a-酮戊二酸 ALT丙酮酸+L-谷氨酸 丙酮酸+O?2+P丙酮酸氧化酶H?2O?2+乙酰磷酸 H?2O?2+4AAP+TBHBA过氧化物酶 红色醌类化合物 1.5 测定方法：取96孔酶标板于A1孔加低值校准血清20ul,A2孔加中值校准血清20ul, A3孔加高值校准血清20ul,A4至H12为测定孔，各孔加标本20ul,再全部加酶试剂工作液200 ul,，混匀，37℃反应10min，立即放入37℃酶标仪进行比色，第一次吸光度为A1，3分钟后进行第二次比色，吸光度为A2，主波长为492nm,次波长为620nm，获取各孔吸光度之差（A2-A1），计算：ALT活性（U/L）=测定孔吸光度/标准孔吸光度*校准血清U/L。? 2 实验结果与讨论 2.1 线性:取ALT值高低不同标本15份，用本法测定，测得值见表1，由表1可以看出，在300U/L之内具有良好的线性，对于高值标本，BK测得值会有所偏低，但不会造成假阴性而导致漏检，为献血员ALT筛查的较为理想方法。 2.2 方法相关性：取12U/L-126U/L共80份，用本法测定，测得与IFCC方法相关系数为r=0.989,y=1.075x+1.031 2.3 反应稳定性：上述80份标本，在37℃反应10分钟后，进行0分钟、2分钟、4分钟、6分钟、8分钟、10分钟、13分钟、15分钟、17分钟、19分钟测定，发现0分钟、2分钟、4分钟、6分钟测得基本一致，8分钟以后值偏低，说明0-6分钟之内进行速率测定，结果可靠，在线性期范围内。 2.4 用低中高校准血清各一份，批内重复20次，求x的平均值，S，CV值，批间连续重复测定20次，求x的平均值，S，CV值（表2），由表2可见，本法测定ALT批内、批间CV值均小于5%，显示该方法的精密度和重复性较好。 2.5 灵敏度:与IFCC方法比较，两中方法测定230份大于45U/L的标本，结果见表3，由表3可见，BK试剂用酶标仪测定ALT有较好的敏感性和特异性。 2.6 本法对干扰因素的消除 2.6.1 标本用量减少，本法样本试剂比例1∶10接近LFCC推荐ALT测定参考方式0.083的比例，不仅可确保底物短时间内不被耗尽，防止产生假阴性而导致漏检，并可相对减少溶血、脂血的干扰。 2.6.2 本法采用速率法，计算上采用第二次OD值减去第一次OD值，可消除中度以下溶血、脂血、胆红素对结果的影响。 2.6.3 使用参考波长620nm,使用双波长测定也可有效克服溶血、脂血的干扰。? 3 结论 丙酮酸氧化酶速率法应用于筛查献血员ALT，具有线性范围大，操作简便，快速，结果准确，重复性好和抗干扰性强等优点，该方法能保证37℃的酶反应最佳温度和活性，又保证无高值ALT假阴性结果的发生，是目前筛查献血员ALT比较理想的选择。 参考文献? [1] 刑文革,马荣,郑怀竟.血站丙氨酸氨基转氨酶检验中几种诊断方法的比较,中国输血杂志,2004;17(5):330-332? [2] 丙氨酸氧化酶速率法试剂盒说明书.? [3] 范泽旭.丙氨酸氧化酶速率法在献血者血液筛查中的应用分析.医学论坛杂志，2004：25（10）：12-13? 注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文 1