南昌县2007年~2009年艾滋病筛查实验室能力验证结果及研究.docVIP

南昌县2007年~2009年艾滋病筛查实验室能力验证结果及研究根据《全国艾滋病检测技术规范》[1] 和《全国艾滋病检测工作管理办法》[2] 规定，艾滋病筛查实验室每年必须参加省级以上实验室组织的能力验证考核：包括盲样血清和职能问卷调查表。按规定时间统一检测并上报结果及相关材料，由省疾控中心专家组统一进行评定，合格的实验室获得相应证书，同时取得艾滋病筛查实验室检测能力资格。南昌县艾滋病筛查实验室自2007年1月正式开展HIV抗体筛查以来，连续3年保持了能力验证结果全优（盲样检测符合率100%）的好成绩。笔者认为这是和实验室进行全程的质量控制密不可分的。具体如下： 1.实验前的质量控制 1.1检测人员：南昌县艾滋病筛查实验室安排了4位专业技术人员，均具备中级卫生技术职称，从事病毒血清学检测工作至少2年以上，有的长达20年；均接受过省级艾滋病检测技术培训并成绩合格。并且其中有3名是党员，对待检测工作有高度的责任感和敬业精神。 1.2实验室分区和环境：实验室分三区，共有面积48?(清洁区15?、半污染区11?、污染区22?)，三区分布合理并有明显的标识。有防蝇防虫设施、空调、感应式水笼头以及数量充足的生物安全防护用品，符合BSL-2级生物安全实验室要求,给检测人员营造了一个安全优良的检测环境。 1.3仪器设备：配备HIV抗体筛查试验所需的设备[2]，包括酶标仪、洗板机、普通冰箱、恒温水浴箱、带盖离心机、微量加样器、高压蒸汽灭菌器、BSL-2生物安全柜。此外，实验室还配备了干湿球温度计、冲眼器、定时器、振荡器、-20℃低温保存箱。其中灭菌器压力表、酶标仪、洗板机、微量加样器和干湿球温度计每年经县或省计量院检定并在有效期内使用,冰箱、水浴箱等温控设备每年10月份进行自校。所有的仪器均定期维护并作好使用及维护记录。 1.4方法和试剂：筛查方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）,其操作简单、灵敏度高、特异性好、经济安全。试剂是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内并经临床质量评估敏感性和特异性均较高的。试剂放置普通冰箱冷藏保存备用。 1.5制作标准操作程序（SOP）：根据实验需要制定覆盖主要工作内容的SOP文件，并在检测过程中根据实际情况以及工作需要每年对其进行修订或增加相应的SOP文件。至2009年12月，本实验室共制定了19个SOP文件:《HIV抗体检测样品的的采集、接收、登记和处理操作规程》、《HIV抗体检测方法和步骤操作规程》、《HIV筛查实验室仪器设备的使用维护和校准》、《HIV抗体筛查实验中的质量控制规程》、《HIV抗体检测结果解释与报告操作规程》、《HIV筛查实验室保密程序》、《HIV抗体检测数据的记录与保存程序》、《HIV抗体检测追踪和处理程序》、《HIV筛查实验室的清理和消毒操作规程》、《HIV筛查实验室安全防护管理规定》、《HIV筛查实验室意外和事故处理操作规程》、《HIV筛查实验室职业暴露的预防和处理规程》、《梅毒螺旋体抗体检测方法和步骤操作规程》、《差错与失控的处理规程》、《样本的保存操作规程》、《试剂的保存操作规程》、《纠正措施》、《实验室应急处理操作规程》、《实验室工作人员交接操作规程》。所有工作人员均要在所从事工作的SOP文件上签名表示已经阅读并掌握了有关内容。 1.6建立并完善相应的实验室制度：制度是一种行为规范。建立相应的实验室制度，可以对实验室检测人员的行为作出规定并起到一定的约束作用，是整个实验过程良好有序运行的重要保证。三年来，我们制定制度、执行制度并在实际操作中不断地检验和完善制度。至今本实验室根据需要共制定了5个制度：《安全操作制度》、《实验室质量控制监督制度》、《废弃物消毒处理制度》、《反馈与报告保密制度》、《失控制度》。 2.实验中的质量控制 2.1严格按照SOP：SOP对我们所进行的实验活动进行了一系列的规定，使我们在实验时有据可依、有章可循，检测活动因此而有序进行，避免了检测人员因为疏忽或不同检测人员操作个体差异而影响整个试验过程。 2.2严格按试剂说明书：每一种试剂均有说明书：对阴阳性对照的数量、温育的温度和时间、洗板的次数、洗液量及是否浸泡等均有详细的说明。我们严格按照试剂说明书操作，任何一个环节的差错都有可能出现试验结果的异常：如洗板次数不够导致洗板不干净、洗液量过多溢出反应孔会交叉污染等均可能出现假阳性,增加洗板次数会造成部分与固相结合的抗原/抗体脱离，从而影响检测的灵敏度，使样本检测的OD值降低；温育时间是影响ELISA法测定HIV抗体结果可靠性的关键因素之一，温育时间不够，会导致弱阳性样本漏检，温育时间过长，液体蒸发，使非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底,温育温度不够，弱阳性标本也难以检出[3]；