结核分枝杆菌H37Rv 色氨酸合成酶α亚基编码基因的克隆、表达及酶学性质分析.pdf

微生物 与感染 2008 年 12 月第 3 卷第 4 期 Journal of Microbes and Infection, December 2008, Vol 3 , No. 4 ·195 · ·论 著 · 结 核 分 枝 杆 菌 H37Rv 色 氨 酸 合 成 酶 α亚 基 编 码 基 因 的克 隆 、表 达 及 酶 学 性 质 分 析 赵静静 徐胜凤 王虹军 沈洪波 王洪海 【摘要 】 目的 克隆表达色氨酸合成酶 α亚基编码基因并对其进行功能分析 。方法 以结核分枝杆菌( 简称结核杆菌) H37Rv 基因组为模板, 扩增 trpA 基因, 构建 pET30a-trpA 重组质粒; 转化重组质粒到大肠埃希菌 DH5 α并在 BL21( DE3) 诱导表 达, 纯化可溶性的结核杆菌重组色氨酸合成酶 α亚基( His-rMtTrpA) 。十 二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶 电泳( SDS) 和 质谱分析测定相对分子质量 ( Mr) 后, 用 圆二色光谱 ( CD) 分析和 同源模 建方法检 测二级和三 级 结构。研 究不 同浓度 His- rMtTrpA 对 β亚基酶活反应的影响。结果 成功克隆了 8 13 bp 的 目的基 因 trpA, 并获得 了高纯度 的 His-rMtTrpA 蛋 白。重 组 蛋白 Mr 为 33. 151 ×103 ( 含载体蛋 白) 。25 ℃时 His-rMtTrpA 的二级结构包括 31. 8% α螺旋、31. 8% β折叠、8. 4% β转角和 27. 9% 无规则卷 曲, 它的三维模型显示 为( β/ α) 8 桶状结构 。酶 学性质研 究表 明, 在 His-rMtTrpA 与 MtTrpB 的摩 尔 比为 2. 2 时, 色氨酸合成酶 α亚基可 以最大限度促进 β亚基酶活反应 。结论 成功得到高纯度 的重组 目的蛋 白 His-rMtTrpA, 其功能分 析为针对色氨酸合成酶的药物筛选设计提供理论基础 。 【关键词 】 结核分枝杆菌; 色氨酸合成酶; α亚基; 同源模建 Cloning, expression and enzymatic analysis of the recombinant tryptophan synthase αsubunit from Mycobacterium tuberculosis H37Rv ZHAO Jing-j ing, XU Sheng-feng, WANG Hong-jun, SHEN Hong-bo, WANG Hong-hai ( State Key Laboratory of Genetic Engineering, Institute of Genetics, School of Life Sciences, Fudan University, Shanghai 200433, China) 【Abstract】 Obj ective To clone and express the Mycobacterium tuberculosis trptophan synthase αsubunit ( MtTrpA) gene trpA and to study the role of MtTrpA. Methods The trpA gene was amplified by PCR from Mycobacterium tuberculosis H37Rv strain genomic DNA and cloned into a prokaryotic expression vector pET30a. The resulting recombinant expression pl