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土壤改良对平地栽参人参茎叶总皂苷含量影响摘要：以人参（Panax ginseng C.A.Mey）茎叶总皂苷为评价指标，研究平地栽参不同土壤改良的最优方案。试验以二次回归正交旋转设计为基本数学模型，研究玉米秸秆、猪粪、鹿粪、拮抗菌、菌糠5种基质的不同组合对人参茎叶总皂苷含量的影响。模型解析发现，在相同的栽培条件下，5种基质对人参茎叶总皂苷含量的贡献从大到小为猪粪、鹿粪、玉米秸秆、菌糠、拮抗菌。计算机模拟寻优表明，玉米秸秆施用量6.64 kg/m2，猪粪施用量3.24 kg/m2，鹿粪施用量3.48 kg/m2，拮抗菌施用量6.87 g/m2，菌糠施用量7.02 kg/m2条件下，人参茎叶总皂苷含量预测值为17.81%。综上这些栽培因素的组合可以作为平地栽培人参的推荐方案。 关键词：人参（Panax ginseng C.A.Mey）茎叶；土壤改良；总皂苷；二次回归正交旋转设计 中图分类号：S567.5+1；S156 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4302—06 人参（Panax ginseng C.A.Mey）是我国的传统中药，为五加科（Araliaceae）人参属（Panax）多年生草本植物，人参皂苷为人参中最主要的活性成分之一[1，2]。人参根中总皂苷含量约为4%[3]，人参茎叶中总皂苷含量则更高。大量研究结果表明，人参皂苷具有抗疲劳、利尿、抗炎、抗缺氧、提高记忆、延缓衰老、提高机体免疫功能、抗癌等生物活性[4—7]。所以人参皂苷的生理活性决定了其具有很高的食用和药用价值。 目前，我国人参种植面积迅速扩大，传统的人参种植仍是伐林栽参方式，这样不仅破坏了森林资源，威胁了很多物种的生存环境，还会造成大面积的水土流失，严重破坏生态环境[8]。由此扩大人参种植面积和产量与现有土地资源短缺矛盾日益严重，所以推广平地栽参技术，节省森林土地资源迫在眉睫，平地栽参将成为人参业可持续发展的必由之路[9]。试验以不同栽参土壤中五年生人参茎叶的总皂苷含量为评价指标，对平地栽参的土壤进行改良。探讨平地栽参土壤改良对人参皂苷含量的影响，以推动平地栽参技术的发展。 1 材料与方法 1.1 材料 人参：人参采自吉林农业大学人参实验基地，每块处理按对角线原则取样，经吉林农业大学张连学教授鉴定均为人参（Panax ginseng C.A.Mey）正品，符合试验要求。将选取好的人参茎叶阴干，粉碎备用。人参皂苷Re标准品由吉林省人参工程技术研究中心提供。 主要试剂：正丁醇、乙醚、浓硫酸、香草醛、高氯酸。 仪器：DHG—9246A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏试验设备有限公司）；UV—754型紫外分光光度计（山东高密彩虹分析仪器有限公司）；TG628A型分析天平（日本岛津公司）；6孔恒温水浴锅（常州奥华仪器有限公司）；KQ—250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）； RE—52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；予华牌SHZ—CD型循环水真空泵（巩义市予华仪器有限公司）。 1.2 方法 1.2.1 试验设计 试验采用二次回归正交旋转设计，以玉米秸秆（x1）、猪粪（x2）、鹿粪（x3）、拮抗菌（x4）、菌糠（x5）为栽培因子，按5因子1/2实施、25型1/2实施试验，总次数36次，5次重复。小区面积3 m2，因素水平设计见表1。收获后各小区单独测人参茎叶总皂苷含量，以结果的平均数进行回归计算。 1.2.2 样品溶液制备及总皂苷含量的测定 1）对照品溶液的制备。精密称取一定量的人参皂苷Re标准品，用甲醇溶解，配制成5 mg/mL的溶液备用。 2）供试品溶液的制备。称取过60目筛的人参茎叶粉末0.5 g，用20 mL去离子水浸泡过夜，超声（功率100 Hz、温度30 ℃）提取20 min，提取3次，过滤，合并滤液。乙醚脱脂两次，每次使用乙醚30 mL，再用水饱和正丁醇60、60、30 mL萃取3次，合并正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25 mL容量瓶中，甲醇定容备用。 3）总皂苷含量的测定。分别吸取供试品溶液和对照品溶液50 μL，置于具塞试管中，低温挥干溶剂，加入1%的香草醛高氯酸试液0.5 mL，充分摇匀后置60 ℃恒温水浴上加热10 min，立即冰水浴冷却15 min，加入77%硫酸溶液5 mL，摇匀，以试剂作空白，消除气泡后用紫外—可见分光光度计检测，在540 nm处测定吸光度。采用外标一点法计算总皂苷的含量[10]。 2 结果与分析 2.1 试验方案及结果 试验方案及结果详见表2，共进行36个独立试验。 2.2 响应面分析 采用SAS软件的RSREG（二次响应面回归模型）程序对试验结果进行响应面分析，经二次回归拟合，得到回归模型参数估