在加工炮制过程中地黄HPLC谱图变化探究研究.docVIP

在加工炮制过程中地黄HPLC谱图变化探究研究【摘要】 目的：研究分析地黄在加工炮制的过程中所含的糖类成分的变化情况。方法：使用柱温为80度的阳离子凝胶柱，和流速是0.7毫升每分钟的水为流动相，用示差折光-检测器对中药地黄以65度烘焙前、一天、六天和烘干品进行切片后蒸四小时后的成分变化情况。结果：鲜地黄主要成分为水苏糖、蔗糖、梓醇。经炮制HPLC谱图在不同阶段有显著的变化，进行烘焙一天后出现半乳糖的显著峰型，烘焙六天后单乳糖峰型更加明显，并发现棉子糖，烘焙品切片后蒸制四小时后葡萄糖和果糖色谱峰显著。结论：通过对加工炮制过程中地黄的HPLC谱图的变化进行研究分析得出，在地黄烘焙阶段水苏糖产生脱半乳糖的化学反应，在烘焙品切片蒸制四小时后又产生了脱果糖的化学反应。地黄的炮制过程从化学变化的角度分析是使鲜品中的水苏糖发生降解。 【关键词】 加工炮制；地黄；HPLC谱图；水苏糖 地黄主产于河南、山西、四川、湖北等地。采收季节为秋分至霜降期前进行采挖[1]。传统的炮制方法为在冬春季节使用温水浸泡半个小时，在夏秋季使用冷水浸泡20分钟，经揉洗去掉泥沙，捞出放进筐内，盖上湿布，第二天取出后切成厚横片，再晒干或者烘干。如果要熟地黄取其滋阴补肾的功效，就用蒸法，把生地同上法先洗净，再放入蒸笼或者砂锅内，使用文武火蒸制12个小时，要注意经常翻动，每斤地黄用酒2两和砂仁末3克，缓慢的酒入地黄内，经蒸透后取出，晾晒到七成干，再将锅内的余汁浓缩成为膏状，再拌入药内，装进钵中，再蒸一次，取出后晾晒到七成干，切成厚横片后晒干[2]。制熟地，一般选择在伏天，趁伏日天晒干，成品油润但不粘手，也不透纸，而选择其他的季节进行炮制加工不能收汗，所以会粘手透纸。如果要用地黄止血的功效，即进行炒炭炮制，把地黄片投入到铜锅或者砂锅内，炒制至其鼓泡颜色变乌黑色为止。本文通过使用HPLC谱图对地黄加工炮制的过程中的化学变化进行研究分析，现报告如下： 1 资料与方法 1.1 实验仪器和试剂 510型-色谱仪，阳离子凝胶交换柱，水，糖类对照品，梓醇对照品。 1.2 实验对象 地黄鲜品大块块根30块，烘焙前为炮制前检测对象；用65度炮制一天后作为炮制中期检测对象；用65度烘焙6天后作为炮制品生地黄检测对象；把生地黄切成厚片，再蒸制四个小时作为炮制品熟地黄检测对象。 1.3 方法 使用高效液相色谱法对每一个检测对象的提取物进行检测，利用峰面积使用外标法计算化学成分含量，每个检测对象检测三次，根据平均值计算化学成分的含量。 2 结果 2.1 临床实验结果 炮制前的检测对象的HPLC谱图中有6个比较明显的峰，保留时间在6.2至6.3分钟的为主要峰，占到总峰面积百分之九十以上，参照对照品的HPLC的谱图得知是水苏糖；烘焙一小时后，出现保留时间为10.2分钟的色谱峰，经对照为半乳糖，保留时间在11.3分钟和9.3分钟的分别是果糖和葡萄糖，虽然出现但还不是非常明显。 2.2 结果数据分析 鲜地黄主要成分为水苏糖、蔗糖、梓醇。经炮制HPLC谱图在不同阶段有显著的变化，进行烘焙一天后出现半乳糖的显著峰型，说明原本成分水苏糖产生了分解，分解成为棉子糖和葡萄糖，烘焙六天后单乳糖峰型更加明显，并发现棉子糖，烘焙品切片后蒸制四小时后葡萄糖和果糖色谱峰显著，炮制品熟地黄检测对象的色谱图和炮制前和烘焙后的检测对象的色谱图进行比较分析发现，比较明显的变化是水苏糖的含量明显的减少，而葡萄糖和果糖的含量明显的增加，这个变化的原因可分析是经过蒸制之后水苏糖产生了脱果糖的反应，而使其中果糖的含量显著增加。 3 讨论 中药地黄为玄参科植物-地黄的块根,使用的历史悠久,为著名的四大怀药其中之一，最早记载在《神农本草经》中，列在上品之中。历代的本草数目均有记载，是中医常用的滋补类重要中药之一[3]。有资料统计，地黄在中药处方中的出现频率排名在前10位，临床使用频率非常高。从20世纪八十年代以来，由于各项检验手法的快速完善，地黄化学成分的研究取得了非常迅速的发展，特别是高效液相色图法的出现，是人们对地黄炮制过程的变化都有了更深入的了解[4]。本文通过使用柱温为80度的阳离子凝胶柱，和流速是0.7毫升每分钟的水为流动相，用示差折光-检测器对中药地黄以65度烘焙前、一天、六天和烘干品进行切片后蒸四小时后的成分变化情况进行研究发现，鲜地黄主要成分为水苏糖、蔗糖、梓醇。经炮制HPLC谱图在不同阶段有显著的变化，进行烘焙一天后出现半乳糖的显著峰型，烘焙六天后单乳糖峰型更加明显，并发现棉子糖，烘焙品切片后蒸制四小时后葡萄糖和果糖色谱峰显著。通过研究分析得出，虽然本种方法还有一定的条件限制，对地黄在加工炮制过程中的各种糖类成分的色谱峰还不能完全辨认清楚，没有准确的定量分析，但从H