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流式细胞仪入门 秦华 译 目 录 前言 第 1 章 综述 第 2 章 液流系统 第 3 章 散射光信号及荧光信号 3.1 散射光信号 3.2 荧光信号 第 4 章 光电系统 4.1 光平台 4.2 光学滤片 4.3 信号探测器 4.4 阀值 第 5 章 数据分析 5.1 数据采集及显示 5.2 设门 5.3 细胞亚群的数据分析 5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析 第 6 章 分选 6.1 分选 第 7 章 激光器及光路校正 7.1 激光器的工作原理 7.2 光路校正 第 8 章 习题答案 第一章 综述 流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高 技术，通常指细胞通过激光束时在液流中的特性，即粒子的大小， 密度或是内部结构，以及相对的荧光强度。通过光电系统记录细 胞的散射光信号和荧光信号可得知细胞特性。 流式细胞仪主要由三部分组成：流动室和液流系统；光路系 统以及电系统。其作用如下： 液流系统：依次传送待测样本中的细胞到激光照射区。 光路系统：细胞由激光激发，通过光学滤片产生光信号，并传 送到相应的探测器。 电系统：把光信号转换为电信号。对于有分选装置的仪器，电 系统可初始化分选条件。 在流式细胞仪中，细胞被传送到液流中的激光照射区。任何 存在于悬液中的直径为 0.2-150 微米的粒子或细胞都适用于流式分 析。在实际工作中，用实体组织进行流式细胞分析往往是不可能 的，分析之前必须对其进行分解。被液滴包绕的粒子称为细胞液 柱，当粒子经过激光照射区时，通过激光激发产生散射光。含有 荧光的粒子就会表现出其荧光特性。散射光和荧光由光路系统（相 应的透镜，滤片和探测器）收集。分光器和滤光片引导散射光和 荧光至相应的探测器，把光信号转换为电信号。 单个粒子通过其表现出的光散射和荧光属性，通过列表模式 （List mode ）完成数据采集，并对样本中的细胞亚群进行分析。 图 1-1 散射光和激发光信号转换成为计算机可处理的充电脉冲 习题：综述 1 流式细胞仪可测量细胞或粒子的哪些属性？ 2 大多数流式细胞仪使用何种光源？ 3 流式细胞仪的三大系统是什么？ 4 哪种类型的生物样本最适于做流式细胞分析？ 5 液流包绕细胞形成 ？ 6 带有荧光的细胞通过激光束时，会产生哪两种光信号？ 7 由粒子激发的光由 收集。 8 所有流式细胞测量是在单个细胞上同时进行吗？（对 错） 9 在进行流式分析之前粒子必须是单个细胞悬液吗？（对 错） 第二章 液流系统 液流系统的作用是依次传送待测样本中的细胞到激光照射 区，其理想状态是把细胞传送到激光束的中心。而且在特定时间 内，应该只有一个细胞或粒子通过激光束。 因此，必须在流动室内把细胞注入鞘液流。流动室是液流系 统的核心部件，台式机中流动室称为样品槽，大型机称之为喷嘴。 在流动室内细胞液柱聚焦于鞘液中心，细胞在此与激光相交。 流动室内充满鞘液，根据层流原理，在鞘液的约束下，细胞 排成单列出流动室喷嘴口，并被鞘液包绕形成细胞液柱。这种同 轴流动的设计，使得样品流和鞘液流形成的流束始终保持着一种 分层鞘流的状态，这个过程称为流体聚焦。该原理适用于所有流 动室，如图 2-1 和 2-2 所示： 图2-1 细胞液柱通过样品槽产生流体聚焦 图2-2 细胞液柱通过喷嘴产生流体聚焦 样本压力和鞘液压力是不同的，且样本压力总是大于鞘液压 力。样本