尼曼-匹克病的SMPD1基因突变探析.pdfVIP

中文摘要 尼曼．匹克病的SMPDl基因突变分析 中文摘要 研究背景 尼曼．匹克病(Niemann．Picks Disease，NPD)是一种常染色体隐性遗传性神 经鞘磷脂沉积病，由于溶酶体神经鞘磷脂水解酶的先天缺乏，导致神经鞘磷脂 在肝、脾、肺、淋巴结、骨髓和脑组织等器官中广泛沉积，使得全身单核巨噬 细胞和神经节细胞中出现大量含有神经鞘磷脂的泡沫细胞。根据临床表现可分 为5型：A型(急性神经型或婴儿型)、B型(慢性非神经型或内脏型)、C型(慢性 1) Phosphodiesterase 基因发生突变所致。到目前为止，已发现的SMPDl基因突变有一百余种，包括 单个碱基替换、小的缺失和插入、剪切位点的改变等。目前国内关于本病的报 道多是关于临床指征和实验室诊断，而有关基因突变检测的研究很少。 目的 研究3个无关的中国人尼曼．匹克病(Nicmann．Pick’SDisease，NPD)家系 发病的分子遗传学基础及SMPDI基因检测在中国人NPD家系基因诊断中的意 义，并探讨其基因型与临床表型的关系。 方法 收集3个无关的NPD家系的临床资料和血液标本。从外周血提取基因组 chain 显子及其侧翼内含子序列，琼脂糖凝胶电泳，扩增产物纯化后直接进行正反向 测序，将测序结果与Gcncbank中的SMPDI基因的正常序列进行比对，找出可 能的致病突变。并将发现的突变所在外显子的扩增产物通过TA克隆技术进一步 中文摘要 证实突变的实际意义。 结果 l家系1先证者的SMPDl基因第l外显子应用TA克隆技术测序结果为随 机挑选的8个单克隆测序结果均显示在编码序列第107碱基处碱基T替换成C， 即T107C，使得遗传密码子GTG被GCG取代，从而使编码的氨基酸第36位缬 氨酸被丙氨酸取代，即p．V36A，属错义突变。先证者父亲的8个单克隆测序结 果显示6个存在该突变，2个为正常序列，先证者母亲的8个单克隆测序结果均 显示4个存在该突变，4个为正常序列。此结果说明家系l先证者为T107C的 纯合突变，其父母均为T107C的杂合突变，符合常染色体隐性遗传规律。对20 个正常对照的PCR扩增产物进行直接正反向测序，均未见此突变。说明该突变 SMPDI基因外显子l上T107C为家系l致病的分子遗传学基础。 正常序列比较，所有成员均发现在SMPDI基因外显子1上有连续6个碱基的缺 家系2和家系3的所有成员随机挑选的8个单克隆测序结果均存在该突变 均未见此突变。 3家系2和家系3包括先证者在内所有成员的SMPDl基因第2、3、4、5、 6外显子及其侧翼序列的正反向测序结果经与正常序列比较，均未发现有核苷酸 序列的改变。 结论 l证实SMPDI基因是本研究中家系l的致病基因，与国内外的报道一致。 2证实SMPDI基因第l外显子上T107C的纯合突变为家系l先证者发病 的分子遗传学基础，其父母是表型正常的基因突变携带者。从基因诊断技术上 确实家系l先证者的疾病(尼曼．匹克病)分型为A型或B型。有利于尼曼．匹‘ 克病的产前诊断、基因诊断和遗传咨询的开展。 3家系2和家系3包括先证者在内所有成员均发现在SMPDI基因第1外显 子上存在e．108．1 13delGCTGC．d2的纯合突变。目前所查阅国内外文献未见相关报 Ⅱ 中文摘要 道，仅在NCBI网站SNP数据库中查到此突变(rHomosapiens】)， 考虑此突变为人类基因多态性。 4对家系2和家系3的SMPDl基因进行突变检测未发现致病突变，尚需进 一步分析研究其致病原因。 关键词尼曼．匹克病；A型尼曼．匹克病；B型尼曼．匹克病；分子遗传学；基因 突变；SMPDI基因；酸性神经鞘磷脂酶 IIl Abstract