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小球藻细胞壁缺陷型突变体的筛选及转化系统的建立-水生生物学报
第 4 0 卷 第 2 期 水 生 生 物 学 报 Vol. 4 0, N o. 2
2 0 1 6 年 3 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA M a r., 2 0 1 6
doi: 10.7541/2016.49
小球藻细胞壁缺陷型突变体的筛选及转化系统的建立
1, 2 3 3 1
王亚丽 徐泽东 蒋思婧 黄开耀
(1. 中国科学院水生生物研究所, 中国科学院藻类生物学重点实验室, 武汉 430072; 2. 中国科学院大学, 北京 100049; 3. 湖北大
学生命科学学院, 武汉 430062)
摘要: 由于高效、稳定遗传转化系统的缺乏, 小球藻遗传改良以及油脂代谢机理的研究等工作难以进行。研
究旨在通过筛选获得小球藻Chlorella vulgaris细胞壁缺陷型突变体, 在此基础上建立其转化系统。首先通过
紫外诱变获得小球藻Chlorella vulgaris的突变体库, 基于细胞壁缺陷型突变体在1% Triton X-100处理后叶绿
素会释放到上清中的原理, 利用酶标仪高通量地从约4000个突变体中筛选获得10株细胞壁缺陷的小球藻。同
时以小球藻内源性β-tubulin 的启动子和终止子作为启动子和终止子, 以Aph Ⅷ (Aminoglycoside 3′-Phospho-
transferase type Ⅷ)作为报告基因构建了转化载体pHK203 。通过优化电转缓冲液组分和电击参数, 确定了细
胞壁缺陷型突变体CWD-3 的最佳转化条件, 即2 μg pHK203, ddH O作为电转缓冲液, 1500 V, 525 Ω, 50 μF的
2
电击条件下, 转化效率可达到40个转化子/μg DNA 。研究为小球藻Chlorella vulgaris 的油脂代谢通路和遗
传改良提供了技术基础, 同时由于可降低破壁成本, 筛选获得的细胞壁缺陷型突变体适于工业化生产小球藻
藻粉。
关键词: 小球藻; 转化; 细胞壁缺陷; 生物柴油
中图分类号: Q813.5 文献标识码: A 文章编号: 1000-3207(2016)02-0370-08
小球藻Chlorella指一类单细胞无鞭毛真核绿 因在Chlorella saccharophila 中的瞬时表达。而后
[1] [11]
藻 , 长久以来被用作研究光合作用机制和二氧化 Liu等 报道了通过原生质体法实现了GUS基因在
[2]
碳同化机制的模式生物 , 并且是食品添加剂和营 Chlorella ellipsoidea中的稳定表达。在细胞壁完整
养保健品的优质来源, 在全球多个公司实现了商业
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