食品微生物之检验方法－粪便性链球菌之检验101年11月19日署授食.DOCVIP

食品微生物之檢驗方法－糞便性鏈球菌之檢驗 101年11月19日署授食字第1011902838號公告 1. 適用範圍：本方法適用於包裝飲用水及盛裝飲用水中糞便性鏈球菌（Fecal Streptococci）之檢驗。 2. 檢驗方法：檢體經濾膜過濾後，以選擇性培養基培養及計數之方法。 2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。每15分鐘落菌數不得超過 15 C FU／培養皿。 2.2. 器具及材料 2.2.1. 乾熱滅菌器。 2.2.2. 高壓滅菌釜。 2.2.3. 冰箱：能維持5 ± 3℃ 者。 2.2.4. 培養箱：能維持內部溫度溫差 ± 1.0℃ 以內者。 2.2.5. 水浴：能維持水溫溫差 ± 0.2℃ 以內者。 2.2.6. 天平：可稱量到 2000 g ，靈敏度為 0.1 g ；可稱量到 120 g ，靈敏度為5 mg。 2.2.7. 無菌濾膜：孔徑 0.2 (m 之親水性醋酸纖維膜。 2.2.8. 薄膜過濾裝置：可放置過濾薄膜之漏斗及真空固定支架基座，漏斗應具無菌性或可滅菌性。 2.2.9. 旋渦混合器（Vortex mixer）。 2.2.10. 濾膜：孔徑0.45 μm之硝化纖維過濾薄膜（水質檢驗用、白色、有格子、已殺菌）或同級品，適用於 2.2.8 .節之薄膜過濾裝置者。 2.2.11. 酸鹼度測定儀（pH meter）。 2.2.12. 吸管輔助器（Pipette aid）。 2.2.13. 吸管（Pipette）：已滅菌。 1 m L吸管應有 0.01 m L之刻度； 5 m L及 10 m L吸管應有 0.1 m L刻度。 2.2.14. 培養皿：已滅菌，內徑約 90 mm ，深度約 15 mm ，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。 2.2.15. 稀釋用容器：無菌袋或有1000 mL、500 mL、 99 m L及 90 m L標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。 2.2.16. 藥勺、剪刀、小刀、壓舌板及鑷子：可滅菌或可拋棄式者。 2.2.17. pH試紙：範圍6-8。 2.2.18. 試藥：30%過氧化氫溶液、氯化三酚基雙偶氮（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride）、結晶紫（crystal violet）、95%乙醇、草酸銨、碘化鉀、碘、沙黃O（safranin O）、氯化鈉、三偶氮鈉（sodium azide, NaN3）、甘油磷酸鈉（sodium glycerophosphate）、麥芽糖（maltose）、乳糖（lactose）、溴甲酚紫（bromcresol purple）、七葉靈（esculin）、檸檬酸鐵（ferric citrate）、葡萄糖（dextrose）及磷酸氫二鈉（Na2HPO4）均採用試藥級， 蛋白腖（proteose peptone）、聚蛋白腖（polypeptone）、酵母抽出物（yeast extract）、洋菜（agar）、牛肉抽取物（beef extract）、蛋白腖（peptone）、牛膽汁（oxgall）、牛腦浸出物（calf brain infusion）及牛心浸出液（beef heart infusion）均採用微生物級。 2.2.19. 試劑 2.2.19.1. 3%過氧化氫溶液：取30%過氧化氫溶液1 mL，加蒸餾水使成10 mL，使用時新鮮配製。 2.2.19.2. 1%氯化三酚基雙偶氮溶液：取氯化三酚基雙偶氮 1 g ，加蒸餾水100 mL，攪拌溶解，以無菌濾膜過濾後，避光儲存備用，當溶液產生粉紅色時即須廢棄不可使用。 2.2.20. 革蘭氏染色液（Gram stain solution）（註） 2.2.20.1. 哈克氏（Huckers）結晶紫液（初染劑） 　　溶液A：取結晶紫 2 g ，溶於95%乙醇20 mL。 　　溶液B：取草酸銨 0.8 g ，溶於蒸餾水80 mL。 　　將溶液A與溶液B混合，靜置24小時後以濾紙過濾，取濾液作為初染劑。 2.2.20.2. 革蘭氏碘液（媒染劑） 　　??? 取碘化鉀 2 g 及碘 1 g 置於研缽中，經研磨5～10秒，加蒸餾水 1 m L研磨，續加蒸餾水 5 m L研磨，再加蒸餾水10 mL，研磨至碘化鉀和碘完全溶於蒸餾水，將此溶液移入褐色試藥瓶，以適量蒸餾水洗滌研缽及杵後，以此洗液併入，使溶液達300 mL。 2.2.20.3. 哈克氏複染液（複染劑） 　　取沙黃O 2.5 g ，溶於95%乙醇100 mL，作複染原液。使用時，取原液10 mL，加入蒸餾水90 mL，供作複染液。 　　　註：革蘭氏染色液因放久可能失效，購買成品時，應注意其保存期限；自行配製者，應檢查其染