慢病毒载体介导的ANNEXIN A10瘤内注射对HepG2细胞皮下移植瘤抑制作用的探究.pdfVIP

摘要 摘要 目的： 1、构建人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤模型； 2、观察重组ANXAl0过表达慢病毒对HepG2裸鼠皮下移植瘤体生长情况 的影响及其对移植瘤细胞中基质金属蛋白酶．9(matrix metalloproteinase．9， endothelial MMP一9)、血管内皮生长因子(vascular factor，VEGF)表达 growth 的影响。初步阐明ANXAl0基因对人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤瘤体增 殖、凋亡的影响及肝癌侵袭及转移相关的细胞因子MMP．9、VEGF的影响。 方法： 1、制备浓度为1×10 7个／ml的HepG2细胞悬液，取0．2ml细胞悬液注入裸 鼠右侧腋下。24天后，瘤体最大直径长至1．7．2．0cm时，取出瘤体，剪成 lmm×lmm×lmm大小组织块，分别接种至24只雌性裸鼠右侧腋窝皮下，每3 天测量瘤体大小，计算瘤体体积。 2、组织块移植后7天，瘤体直径长至0．3．0．5cm时，将裸鼠随机分为3组， 分别命名为实验组(LV．ANXAl0组)、阴性对照组(空载慢病毒组)、空白对 照组。每只动物给予慢病毒量为2×10 7TU(100u1)，空白对照组给予等量的PBS； 3h后重复注射一次。4周后处死24只裸鼠，并取出裸鼠皮下瘤体。采用RT．PCR 在分子水平检测ANXAl0基因mRNA的变化，采用免疫组化在组织层面检测 ANXAl0蛋白的表达，并运用同样的方法分别从基因和／或组织水平检测MMP9、 VEGF表达的变化。tunel法检测各组瘤体细胞凋亡情况。 结果： 1、成功构建人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤模型 2、实验组裸鼠皮下移植瘤生长明显受抑制，体积和重量均明显小于阴性对 照组和空白对照组(体积：F=19．13，PO．01；重量：F=46．91，PO．01) 3、半定量PCR及免疫组化结果显示：实验组裸鼠瘤体较阴性对照组及空白 对照组的ANXAl0mRNA和蛋白表达明显升高；同时，肝癌侵袭转移相关的细 摘要 胞因子MMP．9、VEGF mRNA和蛋白表达明显下降，差异均有统计学意义 (P0．05)。 4、TUNEL结果显示：实验组裸鼠瘤体组织凋亡指数为27．87+1．20％，阴性 对照组和空白对照组分别为3．47+0．72％、3．38+0．77％，实验组与阴性对照组和 空白对照组比较差异均有统计学意义(P0．05)。 结论： 1、ANXAl0基因过表达抑制人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤的生长 并促进其凋亡。 2、ANXAl0基因过表达对人肝癌细胞株HepG2裸鼠皮下移植瘤内与肝癌 侵袭转移相关的细胞因子MMP．9、VEGF可能存在抑制效应。 关键词：慢病毒载体；裸鼠；膜联蛋白A10；基质金属蛋白酶．9；血管内皮生长 因子； Abstract ABSTRACT Objective： 1、 lo construct tumormodelsofhuman subcutaneouslyxenograffs cellline innudemice． hepatocarcinoma HepG2 2、Recombinant lentivirusmediatedAnnexinA10 into of injectingxenografts nude