毛囊生长影响因素和毛囊干细胞分化的诱导研究.pdfVIP

毛囊生长因素和毛囊干细胞分化的诱导研究 摘要 目的：1、通过观察在不同浓度胸腺素β4 干预下，毛囊外根鞘细胞的增殖以及 毛发的生长情况，推测胸腺素β4 促毛囊的生长发育的作用机制； 2、毛囊组织培养法分析毛囊干细胞向神经细胞及角质形成细胞分化的潜能。 方法：1、取乳鼠触须部皮肤为标本，分离去真皮毛囊及毛囊外根鞘细胞，加入 不同浓度胸腺素β4，与空白组对照，并用CCK-8 分析毛囊外根鞘细胞在不同浓 度胸腺素β4 条件下的增殖情况。 2、分离SD 乳鼠触须含结缔组织鞘毛囊，用DMEM 培养基培养毛囊组织获得毛囊 干细胞，并用CD34、和nestin 鉴定其毛囊间充质干细胞。然后分别用角质形成 细胞培养基（DK-SFM）和DMEM-F12 培养基培养毛囊，诱导毛囊干细胞分化为角 质形成祖细胞和神经干细胞，并用免疫组织化学法测定K15 和CD34 来鉴定角质 形成祖细胞，CD34、巢蛋白（nestin）及神经元特异性烯醇化酶（NSE）鉴定神 经干细胞，同时观察每组细胞生长情况。 结果：1、胸腺素β4 干预组毛囊外根鞘细胞的增殖以及毛发的生长情况与对照 组具有显著性差异，且浓度为0.015%胸腺素β4 促进作用最明显。 2、DK-SFM 组成功诱导成角质形成祖细胞，获得细胞形态呈铺路石样，可见核分 裂细胞，免疫组织化学 K15 和β1 整合素染色阳性，CD34 染色阴性；DMEM-F12 组成功获得神经干细胞，获得细胞呈双极和多极神经元样形态，可见核分裂细胞， 免疫组织化学nestin 及NSE 染色阳性，CD34 染色阴性。同期DK-SFM 组获得的 角质形成祖细胞较DMEM-F12 组神经干细胞多。 结论： 1、胸腺素β4 可通过促进毛囊外根鞘细胞的增殖来促进毛发生长； 2、组织培养法培养含结缔组织鞘和毛乳头毛囊可获得毛囊间充质干细胞，获得 的干细胞可能来自毛囊结缔组织鞘和毛乳头。 3、在DK-SFM 培养基条件下体外培养毛囊可诱导毛囊干细胞向角质形成细胞系分 化，所获得的角质形成细胞表达K15，不表达CD34； 4、在DMEM-F12 培养基条件下体外培养毛囊可诱导毛囊干细胞向神经细胞前体分 化，分化获得的细胞具有神经干细胞的特征，表达nestin 和NSE，但不表达CD34； 4 【关键词】胸腺素β4 毛囊外根鞘细胞 毛囊间充质干细胞 神经干细胞 诱导分 化 巢蛋白 角质形成细胞 结缔组织鞘。 5 Study on the influence factor in hair follicle growth and the induced differentiation of Hair follicle stem cell Abstract Objective：1、By observing the proliferation of follicular outer root sheath cells and the growth condition of hair in different concentrations of thymosin ß4 intervention, speculate the growth mechanisms of thymosin ß4 promoting hair follicle； 2、To investigate the potentiality on the hair follicle stem cells differentiating into neural cells and keratinocytes by applying tissue culture. Methods ：1、Taking suckling rat whiskers skin as sample, hair follicles without dermal and follicular outer root sheath cells are separated,then join with different conc