水通道蛋白4和黏蛋白5AC在哮喘小鼠支气管肺组织的表达和地塞米松对其的影响.pdfVIP

目 录 1 水通道蛋白4 及黏蛋白 5AC 在哮喘小鼠支气管肺组织的表达及 地塞米松对其的影响…………………………………………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………3 1.3 前言……………………………………………………………6 1.4 材料与方法……………………………………………………8 1.5 结果……………………………………………………………19 1.6 讨论……………………………………………………………28 1.7 结论……………………………………………………………35 1.8 参考文献………………………………………………………36 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………41 2 致谢……………………………………………………………43 3 气道黏液高分泌的研究进展（综述）………………………44 2 水通道蛋白4 及黏蛋白5AC 在哮喘小鼠支气管肺组织的表达 及地塞米松对其的影响 摘 要 目的：观察水通道蛋白4 （AQP4）和黏蛋白5AC （MUC5AC）在哮喘 小鼠支气管肺组织的表达，以及地塞米松对其表达的影响，探讨AQP4 和MUC5AC在哮喘发病机制中的作用。方法：将24只清洁级C57BL/6小 鼠随机分为对照组、哮喘组和地塞米松治疗组 （DEX组），每组8只。 哮喘模型组：第0 d及14 d腹腔注射新鲜配制的卵蛋白（OVA）与氢氧 化铝混悬溶液0.2ml(1g/L OVA 0.1ml+100g/L氢氧化铝0.1m1)致敏， 在2l、22和23 d予1g/L OVA溶液50 ｕl滴鼻吸入激发。DEX组：致敏同 哮喘组，在滴鼻激发前30 min予地塞米松1.2 mg/kg腹腔注射。对照 组同时给予相同体积的生理盐水腹腔注射及滴鼻。于末次激发 24 h 后处死，取肺组织苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织形态学的改变， 阿辛蓝-过碘酸-雪夫染色法（AB-PAS）观察气道杯状细胞增生和黏液 分泌情况，采用病理评分法评价各组差别。免疫组化法检测AQP4和 MUC5AC蛋白的表达；实时荧光定量PCR检测AQP4和MUC5AC mRNA在肺组 织的含量：以SYBR-green Ⅰ作荧光指示剂，检测AQP4、MUC5AC和管 家基因 β-actin mRNA的量，采用双ΔΔCt法计算目的基因的相对表 达量。各组数据均用均数±标准差表示，各组指标的均数比较均采用 SPSS13软件进行单因素方差分析，P 0.05 为差异具有统计学意义。 3 结果：(1)肺病理组织HE染色检查：哮喘组小鼠支气管、细支气管黏 膜下和血管周围有大量的炎症细胞浸润，气道壁及气道平滑肌增厚， 黏膜下水肿，管腔狭窄，管腔内可见黏液栓堵塞，气道上皮细胞脱落， 杯状细胞增多。DEX组支气管及周围肺组织病理改变较哮喘组上述改 变明显减轻。对照组未见上述病理改变。Underwood 肺组织病理学评 分哮喘组明显高于对照组，差异具有统计学意义（P 0.05），DEX 组评分低于哮喘组，但仍高于对照组，具有统计学意义（P 0.05）。 （2）AB-PAS染色结果：哮喘组小鼠气道上皮有大量杯状细胞增生， 管腔内可见大量黏液分泌，染色胞浆呈蓝色和紫红色；DEX组较哮喘 组明显减轻，对照组黏液分泌不明显。病理评分哮喘组明显高于对照 组，差异有统计学意义 （P 0.05）；DEX组评分低于哮喘组，差异有 统计学意义 （P 0.05）。 （3）免疫组织化学显示：肺组织中有AQP4 和MUC5AC表达。AQP4表达于大小气道上皮，Ⅰ型肺泡上皮细胞胞质均 有表达，尤以气道上皮细胞基底部和气道旁血管周围， 哮喘组表达 呈弱阳性， 地塞米松治疗后表达明显增强哮喘组。MUC5AC主要表达 于气道基底层，哮喘组表达呈强阳性，地塞米松治疗后表达减弱。（4） 实时荧光定量PCR结果：哮喘组AQP4 mRNA相对表达量 （1.1923± 0.1933）低于对照组 （4.4220±2.1953）及DEX组 （2.4132±1.0997）， 差异具有统计学意义 （P0.05）；与对照组相比，DEX组AQP4