类姜黄素和其单体抑制Aβlt;,42gt;生成作用的强弱比较和机制探讨.pdfVIP

类姜黄素及其单体抑制AB42生成作用的强弱比较及机制探讨 类姜黄素及其单体抑制A1342生成作用的 强弱比较及机制探讨 专 业：神经病学 硕士生：刘红英 导 师：李中副教授 摘 要 阿尔茨海然病(Alzheimerdisease，AD)是最常见的痴呆类型，目前广泛认可 聚体形成被认为是AD病理的起始因素。A13由B．淀粉样蛋白前体(amyloid APP precursorprotein,APP)经p一分泌酶(13一sitecleavingenzyme，BACE1)和Y-分 泌酶酶切后生成的。常见的A13片段是A1340和Ap42，Ap42虽然所占的比例仅 10％左右，但A瞰2比Afl40更易聚集、纤维化，形成粥样斑块的核心，毒性作用 更强。因此如何抑制A1342的生成或促进Acl42的清除是目前研究的热点，期望以 此寻找从源头上阻断疾病进展的药物是治疗AD的希望。体外实验和体内实验 已证实姜黄素可抑制A13的产生，然而目前在AD相关的研究中应用的姜黄素 多是类姜黄素化合物，为明确其单体成分的作用，我们课题组分离提纯了类姜 黄素(包括姜黄素Cur，去甲氧基姜黄素DMC，双去甲氧基姜黄素BDMC)的 三种单体成分，并且证实在swAPPHEK293(转染APP基因瑞典突变型)细胞 中，类姜黄素及三种单体成分剂量依赖性的抑制A13的生成。鉴于A1342在AD 病理中的核心作用，本实验继续比较了类姜黄素及单体成分对AB42的不同影响。 研究表明姜黄素可以逆转金属离子、维甲酸及AB42诱导的APP和BACEl表达 的上调，然而类姜黄素及其单体对APP及BACEl的直接影响尚未见报道，目 前姜黄素抑制AB产生的机制尚不是很清楚。由此，提出了本实验： 类姜黄素及其单体抑制AIB42生成作用的强弱比葳及机制探讨 目的 比较类姜黄素及其单体成分抑制A瞰：生成作用的强弱，期望找出最有效的单体 成分；通过检测药物在mRNA和蛋白水平对APP及BACEl的直接影响，探讨 其抑制Ap生成的可能机制，为姜黄素应用于AD患者提供理论依据。 方法 结合本课题组前期工作，选取的药物终浓度为59M，以59M类姜黄素及单体成 分或O．005％二甲基亚砜(对照组)作用于swAPPHEK293细胞24h后： 1．MTT法检测细胞活性； 2．ELISA方法检测细胞培养上清中分泌型AD42浓度； 3．RT-PCR方法检测APP及BACElmRNA的水平； 4．Westem Blot检测APP及BACEl蛋白水平的表达： 5．运用Real．Time miR．106b的影响。 结果 1．59M浓度的类姜黄素及单体对细胞活性无明显影响，表明对细胞无毒性作用； 2．类姜黄素及其三种单体成分都可明显抑制A瞰2的生成，作用强弱依次为 CurDMC类姜黄素BDMC； 3．类姜黄素及其三种单体成分对APPmRNA无影响；在蛋白水平仅Cur能抑 制APP的表达，与对照组相比，差异有统计学意义； 4．DMC及BDMC能降低BACElmRNA的表达，与对照组相比，差异有统计 学意义；类姜黄素及Cur对BACEl 蛋白的表达，差异有统计学意义；类姜黄素、Cur及DMC对BACEl蛋白的表 达无明显影响。 5．Cur对miRl7．5p和miR-106b无明显影响。 结论 1．在swAPPHEK293细胞中，类姜黄素及单体抑制A瞰2生成作用的强弱顺序 为：CurDMC类姜黄素BDMC； 2．Cur可通过在转录后水平调节APP蛋白的表达而抑制Ap42的生成； 3．BDMC可通过在转录水平调节BACElmRNA和蛋白的表达而抑制Afl42的生 Ⅱ 类姜黄素及其单体抑制Ap42生成作用的强弱比较及机制探讨 成； 后水平抑制APP蛋白表达的； 5．证实了在抑制A艮2生成作用的强弱比较中，Cur是姜黄中抑制性作用最强的 单体，其次为DMC；同时证实了类姜黄素对APP蛋白的表达无明显影响。 关键词 阿尔茨海默病；姜黄素；类姜黄素化合物；p-淀粉样蛋白前体；3-分泌酶