呕吐毒素荧光定量快速检测卡技术性能评估.pdfVIP

呕吐毒素荧光定量快速检测卡性能评估测试 摘要：对上海飞测生物科技有限公司研发生产的呕吐毒素荧光定量快速检测卡在粮食谷物饲料中的检测 性能进行了评估。该产品的检出限为 25μg/kg ，最低定量限为 82μg/kg，线性范围为 100-5000μg/kg，线性 范围内的添加回收率为 83.51%~113.84%，同一个样本的检测3 次的CV14.75%，与其他真菌毒素的交叉 反应率均小于 5%，与其代谢物的交叉反应率在20% 以内。该产品具有操作简便、灵敏准确、快速定量、 重现性好等优点，非常适合用于对粮食谷物饲料中呕吐毒素的进行快速定量测定。 关键词：呕吐毒素快速定量检测；荧光定量免疫层析；呕吐毒素；粮食谷物饲料 呕吐毒素主体成分为 DON （deoxynivalenol,脱氧雪腐镰刀菌烯醇），属于单端孢霉烯族化合物，主要 由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、粉红镰刀菌、雪腐镰刀菌等镰刀菌产生。另 外，头孢菌属、漆班菌属、木霉属等菌株都可产生该毒素。单端孢霉烯族毒素共有 150 多种，是一类强 有力免疫抑制剂，所引起典型症状是采食量降低，所以这类毒素又叫饲料拒食毒素。呕吐毒素 （DON ） 是其中最重要一种毒素，主要来自镰刀菌属（Fusarium ），尤其是禾谷镰刀菌（Fusariumgraminearum ） 和黄色镰刀菌（Fusariumculmorum ）。由于它可以引起猪的呕吐，故又名呕吐毒素（vomitoxin ，VT ）。 该毒素最早于 1970 年在日本香川县的一次赤霉病大麦中毒的病毒中发现，1972 年，由日本的 Morook 等首次从赤霉病大麦中分离，Yoshizaw 等阐明了这种新的真菌毒素的结构，并将其命名为 4- deoxynivalenol （DON ）。1973 年 Vesonder 等在美国从被镰刀菌污染的玉米中分离出了同样的化学物质， 因为该种物质可以引起猪产生呕吐症状，故命名为呕吐毒素，并相继发现可以在赤霉病大麦、被镰刀菌 污染的玉米中分离出该物质。呕吐毒素是食品中常见的真菌毒素，在自然界中广泛存在，通常在欧洲及 北美发现的 3 种毒素是脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇和 15-脱氧雪腐镰刀菌烯醇。由 于它们具有很高的细胞毒素及免疫抑制性质，因此，对人类及动物的健康构成了威胁，特别是对免疫功 能具有明显的影响。根据 DON 的剂量和暴露时间不同可引起免疫抑制或免疫刺激。当人摄入了被DON 污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造 血系统造成死亡。由于中国传统饮食习惯中粮谷比例大大高于西方，使得呕吐毒素的危害更为突出。 1998 年，在国际癌症研究机构公布的评价报告中，呕吐毒素被列为 3 类致癌物。欧盟要求呕吐毒素要小 于 1.0mg/kg；中国谷物饲料中要求呕吐毒素的含量低于低于 1 .0mg/kg，饲料中低于5 mg/kg 。 目前，国标法测定呕吐毒素需要大型的仪器设备，价格昂贵，操作过程复杂、时间较长，且无法在 现场和基础小型实验室使用。除此之外，也有采用呕吐毒素酶联免疫试剂盒或胶体金快速快速检测卡用 于大量样品的筛查，操作简便，检测快速，成本也较低，但准确性和重复性较差，容易造成假阳性或者 假阴性。因此，急需一种既简便快速，又能准确定量的检测方法，荧光定量免疫层析正好可以满足这种 需求。本文通过对多种粮食谷物饲料样品的实测，验证了上海飞测生物开发的呕吐毒素荧光定量快速检 测卡的技术性能。 1 实验材料和方法 1 / 5 1.1 试剂和材料 除注明外，均为分析纯，试验用水均为UP 水。 呕吐毒素荧光定量快速检测卡 （由包被有荧光微球标记呕吐毒素抗体的乳胶垫、喷涂有呕吐毒素抗 原的检测线和喷涂有羊抗鸡二抗的控制线的NC 膜、样品垫及吸收垫组成）、样品提取液、样品稀释液、 标准曲线 ID 卡及标准曲线条形码均由上海飞测生物科技有限公司提供。 呕吐毒素及其他真菌毒素的标准品：购自 Sigm 公司； 大米、玉米、小麦、面粉等样品从超市购得或从企业取样。 麸皮，小麦、面粉等饲料样品从饲料厂和企业取样。 1.2 仪器与设备 FD-100 型荧光免疫定量分析仪和 FD-500 型试纸条恒温孵育器，上海飞测生物科技有限公司提供； 低速离心机，上海卢湘仪离心机