肾癌相关抗原G250致敏的DC-CIK共培养细胞对人肾癌细胞的杀伤影响.pdfVIP

摘要 摘要 研究背景： 肾癌占全身恶性肿瘤的3％，为泌尿系肿瘤中发病率仅次于膀胱癌的肿瘤， 且放化疗均不敏感。局限性肾癌患者，通过手术治疗可获得痊愈。但约30％的 肾癌患者发现肿瘤时已有转移。近年来研究表明在抗肿瘤的细胞免疫中CD8+T 的参与。树突状细胞(dendriticcells，DC)是功能最强的抗原递呈细胞，用自体 induced 的破裂瘤体细胞致敏DC细胞激活细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine 共培养细胞对人肾癌细胞的杀伤作用的研究，探讨肾癌免疫治疗的功效。 实验方法： 1、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的诱导和扩增 取人外周全血10ml，用等量PBS稀释，加入10ml淋巴细胞分离液。收集 中间层细胞，置37℃、5％C02培养箱中培养。收集非贴壁的细胞，加入IFN吖， 用CIK培养液培养，诱导产生CIK细胞。 2、树突状细胞(DC)的体外培养 轻加入到血的下面。收集淋巴细胞排中间层细胞；置37。C、5％C02培养箱中培 养。收集贴壁细胞的单个核细胞，加入含10％血清的RPMll64，37℃、5％C02， 半定量换液培养。第8天时，可得到DC细胞，继续培养。 3、DC．CIK、DC．CIK．G250的体外培养 收集培养至成熟的DC以及CIK细胞，加入CIK培养液，收集悬浮细胞，行 细胞计数，以DC：CIlol：4的比例进行混合，再继续用CIK培养液培养，可得 DC．CIK。 将肾癌相关抗原G250以750ug／L的浓度加入到培养至成熟状态的DC细胞 中，37℃、5％C02培养，加入CIK培养液，收集悬浮细胞，行细胞计数，以 DC：CIK=I：4的比例进行混合，再继续用CIK培养液培养，培养后可得到 DC．CIK．G250细胞。 摘要 4、实验分组及观察指标 分别设3个复孔。各实验组都分别做4个时间点，处理l、3、5、7天，收细胞 及CIK细胞表型分析。并研究不同的效靶比下，各组细胞对ACHN人肾癌细胞杀 伤作用。 结果： 随着时间推移，除对照组外IL．2的表达逐渐增加，所有时间点IL．12表达 IL．12表达量明显高于其余各组，差异具有统计学意义；所有时间点 CIK．DC．G250组IFN吖表达量总体高于其余各组，差异具有统计学意义。 随着效靶比增加，CIK细胞对ACHN人肾癌细胞杀伤作用增强，效靶比20：1 高于CIK细胞和DC．CIK细胞，效靶比为20：l时，达到90．2％。 结论： 经肾癌相关抗原G250致敏的DC细胞与CIK细胞共培养后，能提高针对肾 癌的免疫作用，能够抑制肾癌细胞。免疫治疗结合药物靶向治疗作为一种新方 法，为肾癌的生物治疗奠定了实验基础，用于临床肿瘤治疗前景广阔。 关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)；树突状细胞(DC)；肾癌细胞；免疫 效应细胞． III Abstract ABSTRACT Background： cancelaccountsfor3％ofthe tumor．Theincidence Kidney Systemicmalignant to bladdertumor．Itisnotsensitiveto of cancersecond incidenceof kidney yhe radimionand oflimited cancerCanbeobtained chemotherapy．Thepatients kidney by treatment about30％of cancer hadbeenfound surgical healing．