高中生物一轮复习-专题5-DNA和蛋白质技术精品学案-新人教版选修1.docVIP

专题5 DNA和蛋白质技术 【高考目标定位】 1、蛋白质的提取和分离 2、PCR技术的基本操作和应用 【考纲知识梳理】 一、DNA的粗提取与鉴定 1、实验原理：DNA与杂质的溶解度不同，在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，在0.14mol/l的NaCl溶液中溶解度最低。 2、实验设计： ①实验材料的选取：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。 ②破碎细胞：动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 ③去除滤液中的杂质：利用DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同，控制NaCl溶液的浓度去除杂质。 ④DNA的析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。 ⑤DNA的鉴定：取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。 二、多聚酶链式反应扩增DNA片段 1、PCR原理：DNA的热变性 2、PCR反应过程：一般要经历三十多次循环，每次循环可分为变性→复性→延伸三步。 3、PCR技术中控制不同温度的意义 （1）90℃以上时变性，双链DNA解聚为单链； （2）50℃左右时复性，两种引物与两条单链DNA结合； （3）72℃左右时延伸，TaqDNA聚合酶促使DNA新链的合成。 三、血红蛋白的提取和分离 1、方法及原理 方法 原理 凝胶色谱法 根据相对分子质量的大小分离蛋白质 电泳法 各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同来分离蛋白质 2、操作程序： （1）样品处理： 红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液 （2）粗分离——透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。 （3）纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 （4）纯度鉴定：一般用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 3、细胞内DNA复制与PCR技术的比较 细胞内DNA复制 PCR 不同点 解旋 在解旋酶作用下边解旋边复制 80℃~100℃高温解旋，双链分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 TaqDNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 温度 体内温和条件 高温 相同点 （1）需提供DNA复制的模板 （2）四中脱氧核苷酸作原料 （3）子链延伸的方向都是从5ˊ端到3ˊ端 （4）都需要酶的催化 【要点名师精解】 一、DNA粗提取中注意事项 1、实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA，第二次目的是稀释NaCl溶液，使DNA从溶液中析出。 2、预冷的酒精溶液具有以下优点: （1）抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解。 （2）降低分子运动易于形成沉淀析出。 （3）低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。 【例1】关于DNA粗提取与鉴定实验的有关说法中正确的是（ ） A.充分理解DNA的盐溶液是0.14mol/L的NaCl溶液 B.实验中提取较纯净的DNA利用了DNA不溶于酒精的特点 C.对最后提取出的DNA用二苯胺试剂鉴定时不需要加热 D.实验操作过程中先后两次加入蒸馏水的作用相同 【解析】DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最小。提取较纯净的DNA时可加入95%的冷却的酒精，由于DNA不溶于酒精，DNA会从溶液中析出。DNA溶液中加入二苯胺试剂加热后才会变成蓝色。实验操作中先后两次加入蒸馏水的作用不相同，第一次加入蒸馏水是使细胞吸水胀破，释放出核物质，第二次加入蒸馏水是降低NaCl浓度，使DNA析出。 【答案】B。 【感悟高考真题】 （2010·广东高考）22.新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配正确的是 PCR技术——扩增蛋白质 B.杂交瘤技术——制备单克隆抗体 C.光学显微镜——观察叶绿体的基粒 D.花粉离体培养——培育单倍体植物 【解析】本题主要考查学生的理解能力。PCR技术只能用来扩增核酸，不能用来扩增蛋白质；利用光学显微镜无法观察到叶绿体。 【答案】BD （2010·江苏高考）32．(7分)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动。具体步骤如下： 材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份．每份l0 g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于一20℃条件下保存24