脐带间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的实验探究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………．1 英文摘要……………………………………………．3 研究论文 脐带间充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的实验研究 前言……………………………………………………．．6日IJ舌……………………………………………………．． 材料与方法………………………………………．．7 结果………………………………………………11 1≈丁歹1≮……………………………………………… 4 附图……………．j………………………………．1 附表………………………………………………19 0 讨论………………………………………………2 结论………………………………………………24 参考文献……………………………………………．25 综述干细胞与组织工程脂肪…………………………28 致谢………………………………………………．42 个人简历……………………………………………．．43 中文摘要 人脐带闫充质干细胞向脂肪细胞诱导分化的实验研究 摘 要 间充质干细胞是一类较为原始的干细胞，具有高度增殖性和多向分化 潜能。它的多向分化潜能在神经、血管、心肌梗死和肿瘤的治疗等多方面 取得了～定成就，已广泛应用于自体和异体移植。目前，研究较多的是骨 髓间充质干细胞，而脐带间充质干细胞近几年才被人们重视并加以研究。 与骨髓间充质干细胞相比，脐带间充质干细胞(UCMSCs)不仅具有相似的 增殖特性及多向分化潜能，而且具有取材方法简便、来源广泛、免疫原性 更低等优势，这使其成为近年来干细胞研究领域中的热点。干细胞研究的 一个重要方向就是作为组织工程的种子细胞，脐带间充质干细胞具有上述 优点，这使脐带间充质干细胞成为目前组织工程中种子细胞的最佳选择。 而在组织工程脂肪的构建中，如何实现脐带间充质干细胞的定向成脂分 化，是组织工程脂肪重要的研究课题。 umhilicalcord 目的：1、探讨人脐带间充质干细胞(human mesenchymal stem 研究；2、通过观察不同诱导条件下hUCMSCs向脂肪细胞定向分化的差 别，探索脐带间充质干细胞向脂肪细胞分化的最佳条件。为其在组织工程 脂肪中应用的可行性提供理论依据，为解决临床软组织缺损的损伤修复和 整形难题提供理论和实践基础。 方法：无菌条件下收集剖宫产新生儿脐带，用20ml注射器分别插入 一根脐静脉及两根脐动脉内，反复冲洗，冲去血管内残存积血。用经过消 毒的组织剪将脐带剪碎，直至lII衄3大小组织块。直接将剪碎的组织块接 种于含DMEM／F12培养基的培养瓶中，进行原代培养。当细胞达到80％ 融合状态时，消化传代进行纯化和扩增培养。观察并记录细胞形态学变化， 流式细胞仪测定细胞表面标记；利用不同组合的成脂诱导培养基定向诱导 hUCMSCs分化为脂肪细胞；利用油红．O免疫组化染色鉴定分化后的细 胞；统计学分析不同条件诱导脐带间充质干细胞向脂肪细胞分化的差异。 结果：组织块培养法4“天于组织块间隙可见散在分布的成纤维样细 胞，2周左右细胞达到80％融合。经传代后，可以得到较为纯化的成纤维 中文摘要 样细胞，细胞约每三天可达到80％融合，需再次传代，细胞可传代20代 以上。细胞传代培养至第10代，无明显的形态和增殖能力改变；经传代 纯化的脐带间充质干细胞形态均一，为梭形或成纤维样，呈漩涡样生长。 性。不同诱导条件均可诱导UC．MSCs生成脂肪细胞，而合用地塞米松、 1．甲基．3．异丁基黄嘌呤、胰岛素和吲哚美辛时效果最佳，诱导MSCs生成 脂肪细胞的转化率可高达90％以上，较单独应用一种诱导剂转化率明显 提高，绝大多数为油红．O染色阳性的成熟脂肪细胞。 结论：1、经组织块培养法可以从新鲜脐带中获得间