脐带间充质干细胞对C57BL6小鼠Lewis肺癌化疗影响的实验探究.pdfVIP

／嬲嬲燃 脐带间充质干细胞对C57BL／6小鼠Lewis肺癌化疗 影响的实验研究 研究生：李福泉 专业：外科学 导 师：卢兆桐 教授 中文摘要 目的 stem 间充质干细胞(mesenchymal 分化及免疫调节等功能；临床中已被广泛应用于脊髓损伤、糖尿病足、自身 免疫性疾病等多种疾病的治疗。第一部分旨在建立从脐带华通氏胶中分离间 充质干细胞的方法，并研究其生物学性状，为临床间充质干细胞的大量应用 提供物质基础。第二部分利用Lewis肺癌动物模型，探讨脐带来源的间充质 干细胞对恶性肿瘤生长及其转移的影响，为我们利用脐带间充质干细胞修复 肿瘤病人因化疗引起的各种损伤提供实验依据。第三部分利用Lewis肺癌动 物模型，研究脐带间充质干细胞对化疗药引起的骨髓抑制、胃肠道损伤及心 肌损伤有无修复功能，为临床综合治疗肺癌、减少化疗药物的毒副作用寻找 新的防治方法。 方法 第一部分：脐带华通氏胶剪碎后直接放入富含血小板血浆的DMEM培 养基中培养，镜下观察细胞学形态，细胞计数并绘制细胞生长曲线，流式细 胞仪检测细胞表型，Oil．Red．O、AlizarinReds染色分别判定脐带间充质干细 胞向脂肪细胞和成骨细胞分化的能力。第二部分：将l6只C57BL／6小鼠建 细胞(1×106／只)，在第2 1天时处死全部荷瘤小鼠，观察瘤体生长情况及肺 +MSC组尾静脉给予脐带问充质干细胞1×106／只，第5、6天均停药，上述 数量，CK．MB、LDH等心肌酶谱，同时留取小鼠心脏、部分小肠及肺脏， 待作HE染色和TUNEL心肌凋亡染色。 结果 第一部分：按照该分离方法，平均每厘米脐带可获得1．0×106个成纤维 样细胞，每次分离10cm长的脐带，那么经过3周培养即可获得1．0×108个成 CDl05、CDl 纤维样细胞。免疫表型显示， 06阳性， 1 阴性。体外诱导实验证实该细胞具有向脂肪和成骨细胞分化的能力。第二部 4．155士1．1 分：NS组和MSC组的平均瘤重分别为4．5875+1．049、39，两组 好于ADM组。在第1 组分别与NS组相比，小鼠体重均明显减低，差异具有统计学意义，P值分 别为0．003 显，差异具有显著性(P=0．01 光泽，而ADM组胃肠道苍白；病理切片HE染色NS组肠道粘膜光滑，微绒 、 肌凋亡染色ADM组心肌壁明显变薄，细胞皱缩，变形，体积变小，TUNEL 心肌凋亡染色可见细胞核呈棕色颗粒的阳性细胞；ADM+MSC组心肌壁较 厚，细胞形态正常，TUNEL心肌凋亡染色未见呈棕色颗粒的阳性细胞。 结论 1．利用分离华通氏胶剪碎后直接在富含血小板血浆的培养基中培养，不 仅操作简单，减少了污染几率，与酶消化法相比更容易出现细胞克隆，而且 避免了动物血清可能引起的过敏及免疫排斥反应，进一步提高了临床应用的 安全性。 2 明显影响，但能够明显抑制肿瘤的转移。 3·脐带间充质干细胞可修复化疗药引起的胃肠道损伤，心肌损伤，减轻 化疗药引起的骨髓抑制，降低化疗药物的毒副反应，为临床综合治疗肿瘤提 供了一种新的方法。 关键词 脐带间质干细胞；脂肪细胞；成骨细胞；Lewis肺癌；转移；化疗 副反府 EFFECTSOF UMBILICAL CORD．DERIVED STEMCELL