脐血间充质干细胞移植治疗帕金森大鼠的实验探究.pdfVIP

脐血问充质干细胞移植治疗帕金森大鼠的实验研字 研弛冯德朋 删f㈣必 专业：神经病学(脑血管病机理与防治) 导师：李雪莉副教授 目的： stem 研究脑内移植脐血间充质干细胞(mesenchymalceils，MSCs)治疗帕金森 病(Parkinson’SDisease，PD)的可行性及可能的机制。 方法： (1)帕金森大鼠模型建立：腹腔注射1％戊巴比妥麻醉，麻醉平稳后将大鼠固定于 立体定向仪上，减开头部皮肤暴露前囟，以前囟为标准参考点，确定右侧黑质致密部 (SNC)：前囟后4．4衄，矢状缝右侧1．2II皿，硬膜下7．8m／ii和中脑腹侧被盖(VTA)： 前囟后4．8mill，矢状缝右侧1．0衄，硬膜下7．8nlnl。每点注射4 egL的6一羟基多巴 5|I L，注射速度1|I 诱导其向健侧旋转，共筛选3周，每次记录30分钟，旋转210圈以上者为PD模型 大鼠。 (2)脐血间充质干细胞采集：无菌条件下采集脐血样本(每份60到120毫升。脐 血采集来自聊城市人民医院妇科，并且经过伦理部门审核及家属知情签署知情同意 书)。 (3)干细胞传代分离：细胞接种于含15％的马血清和15％胎牛血清(FCS)的低 换液传代，以后每2~3天半量换液传代。培养后第三代分离用于移植。 1．0ram，MR3．4ram，DV 硬脑膜下(DV)5．0ram；②AP 4．5mm。腹腔内注射1％戊 106／只，每点注射5 巴比妥(40mg／kg)麻醉大鼠，平稳后立体定向注射MSCs’1．0X |ll(1la 组与MSCs移植组移植的靶点一致，注射同体积的PBS。 (5)行为学检测：分别于术后每周进行旋转行为测试，大鼠的腹内注射阿朴吗啡 0．5mg／kg，注射10分钟后开始观察，并记录大鼠的旋转行为共记录30分钟。 醉，开胸，经心脏从胸主动脉滴入200ml生理盐水，然后灌注4％多聚甲醛200ml进 行内固定，断头取脑，浸泡于4％多聚甲醛24小时以上进行外固定，脱水、包埋、常 规石蜡切片。片厚5-6|Im，取纹状体和黑质部分行免疫组织化学染色显示。 (7)统计学方法：所有资料应用SPSSl7．0软件包处理，数据以均数±标准差表示， 计量资料采用t检验，p0．05有统计学意义。 结果： ． 1．移植后PD大鼠行为学检测阿朴吗啡诱导的大鼠旋转试验显示移植MSCs组 ．PD大鼠转圈次数随着时间延长逐渐下降，而移植PBS的对照组PD大鼠转圈次数没 有明显改变，且移植后3周至8周两组各时间点旋转圈数有明显差异(P0．05)， 具有统计学意义。 2．脑组织免疫组织化学染色术后2周时，MSCs移植鼠纹状体针道内及附近TH 阳性细胞存在；PBS注射对照组鼠的纹状体针道处无外源性细胞存在。术后2个月时， MSCs移植组鼠纹状体针道内仍有细胞存活，并有TH阳性细胞存在，PBS注射对照 组鼠纹状体处无TH阳性细胞表达。 3．实验大鼠的正常侧的黑质部分表达TH阳性细胞明显多于损伤侧。损伤侧2 组阳性表达细胞数多于PBS组，但无统计学意义(P0．05)。 4．实验动物脑内未发现畸胎瘤。 结论： 脑内移植脐血间充质干细胞后可存活并且分化形成TH蛋白，且帕金森模型大鼠 一 行为学有明显改善，说明问充质干细胞移植治疗帕金森病的可行性。 关键词： 脐血间充质干细胞；帕金森病；移植 2 INTRACEREBRALTRANSPLANTATIoN STUDYoF