浙江中医药生化大实验题库.docVIP

复习参考资料： 1、生物化学的实验技术有哪些? 1、 ①离心技术 ②层析技术 ③电泳技术 ④免疫化学技术 ⑤分光光度技术 ⑥高效液相技术 3、什么是离心力? 什么是相对离心力? 各用什么表示? 3、 1 ）离心力(centrifugal force，Fc) 离心作用是根据在一定角度速度下作圆周运动的任何物体都受到一个向外的离心力进行的。离心力(Fc)的大小等于离心加速度ω2X与颗粒质量m的乘积。 2 ）相对离心力(relative centrifugal force，RCF)就是实际离心场转化为重力加速度的倍数。 4、制备性离心机可分为几类,叙述每类的特点？ 4、 制备性离心机可分为三类： ⑴ 普通离心机：最大转速6000 rpm左右，最大相对离心力近6000×g，用于收集易沉降的大颗粒物质，如红血球、酵母细胞等。 ⑵ 高速冷冻离心机：最大转速为20000～25000rpm（r/min），最大相对离心力为89000×g，用于微生物菌体、细胞碎片、大细胞器、硫铵沉淀和免疫沉淀物等的分离纯化工作。 ⑶ 超速离心机：转速可达50000～80000 rpm，相对离心力最大可达510000×g，它能使亚细胞器得到分级分离，还可以分离病毒、核酸、蛋白质和多糖等。 5、转头可分为几类,每类的特点是什么? 5、转头： ⑴ 角式转头：角式转头是指离心管腔与转轴成一定倾角的转头。它是由一块完整的金属制成的，其上有4～12个装离心管用的机制孔穴，即离心管腔，孔穴的中心轴与旋转轴之间的角度在20～40度之间，角度越大沉降越结实，分离效果越好。这种转头的优点是具有较大的容量，且重心低，运转平衡，寿命较长，颗粒在沉降时先沿离心力方向撞向离心管，然后再沿管壁滑向管底，因此管的一侧就会出现颗粒沉积，此现象称为“壁效应”，壁效应容易使沉降颗粒受突然变速所产生的对流扰乱，影响分离效果。 ⑵ 荡平式转头：这种转头是由吊着的4或6个自由活动的吊桶（离心套管）构成。当转头静止时，吊桶垂直悬挂，当转头转速达到每分钟200到800转时，吊桶荡至水平位置，这种转头最适合做密度梯度区带离心，其优点是梯度物质可放在保持垂直的离心管中，离心时被分离的样品带垂直于离心管纵轴，而不像角式转头中样品沉淀物的界面与离心管成一定角度，因而有利于离心结束后由管内分层取出已分离的各样品带。其缺点是颗粒沉降距离长，离心所需时间也长。 ⑷ 垂直转头：其离心管是垂直放置，样品颗粒的沉降距离最短，离心所需时间也短，适合用于密度梯度区带离心，离心结束后液面和样品区带要作九十度转向，因而降速要慢。 6、离心管可分为几类,每类的优缺点是什么? 6、离心管主要用塑料和不锈钢制成，塑料离心管常用材料有聚乙烯（PE），聚碳酸酯（PC），聚丙烯（PP）等，其中PP管性能较好。塑料离心管的优点是透明（或半透明），硬度小，可用穿刺法取出梯度。缺点是易变形，抗有机溶剂腐蚀性差，使用寿命短。 不锈钢管强度大，不变形，能抗热，抗冻，抗化学腐蚀。但用时也应避免接触强腐蚀性的化学药品，如强酸、强碱等。 7、何谓差速沉降离心法, 优缺点(特点是)是什么?适用于分离哪些物质的离心? 7、差速离心法 利用不同的粒子在离心力场中沉降的差别，在同一离心条件下，沉降速度不同，通过不断增加相对离心力，使一个非均匀混合液内的大小、形状不同的粒子分部沉淀。 8、差速区带离心法, 优缺点(特点是)是什么?适用于分离哪些物质的离心? 8、速率区带离心法 速率区带离心法是在离心前于离心管内先装入密度梯度介质(如蔗糖、甘油、KBr、CsCl等)，待分离的样品铺在梯度液的顶部、离心管底部或梯度层中间，同梯度液一起离心。 9、等密度区带离心法, 优缺点(特点是)是什么?适用于分离哪些物质的离心? 9、等密度离心法 等密度离心法是在离心前预先配制介质的密度梯度，此种密度梯度液包含了被分离样品中所有粒子的密度，待分离的样品铺在梯度液顶上或和梯度液先混合，离心开始后，当梯度液由于离心力的作用逐渐形成底浓而管顶稀的密度梯度，与此同时原来分布均匀的粒子也发生重新分布。当管底介质的密度大于粒子的密度，即ρp ρm时粒子上浮；在弯顶处ρp ρm时，则粒子沉降，最后粒子进入到一个它本身的密度位置即ρp =ρm时，dx/dt为零，粒子不再移动，粒子形成纯组份的区带，与样品粒子的密度有关，而与粒子的大小和其他参数无关，因此只要转速、温度不变，则延长离心时间也不能改变这些粒子的成带位置。 一般在物质的大小相近，而密度差异较大时应用此法。常用的梯度液是CsCl。 等密度离心法的分离效率取决于样品颗粒的浮力密度差，密度差越大，分离效果越好，与颗粒大小和形状无关，但大小和形状决