畜牧专业本科专业技能训练(实验室操作技能).docVIP

动物科学专业基本技能项目内容 第一章 实验室操作技能 一、精液品质检查 （一）精子活率、密度检查，理化因素对精子的影响 实验目的 掌握检查精子活率、密度的方法；熟悉感官检查精液品质的方法；验证观察理化因素对精子运动及生存性能的影响。 实验材料 1. 精液 羊新鲜精液 2. 药品器械 显微镜、载、盖玻片、搪瓷盘、温度计、滴管、擦镜纸、纱布、蒸馏水、3%和0.9%氯化钠溶液、2%煤酚皂溶液、1/1000新洁尔灭溶液、75%酒精。 实验内容 1. 精液的感官检查 记入下表 2. 精子密度检查及活率评分 (1)查精子的密度 取1小滴精液滴在载玻片上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，不得存气泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置于显微镜下放大400-600倍观察。 密——在整个视野中精子密度很大，彼此之间空隙很小，看不清楚各个精子运动的活动情况。 中——精子之间的空隙明显，精子彼此之间的距离约有一个精子的长度，有些精子的活动情况可以清楚地看到。 稀——精子分散于视野内，精子之间的距离超过一个精子的长度。 (2)评定精子的活率 必须于采精后立刻在22-26度的实验室内进行。精子活动有三种类型，即直线前进运动、旋转运动和振摆运动。评价精子活率是根据直线前进运动精子数的多少而定的。 精子活率 =呈直线运动精子数 / 总精子数 ╳100% 十级制——100%为1.0级，90%为0.9级，依次类推。 种公畜精液品质检查登记表 畜别 畜号 采精时间（年月日） 射精量 色泽 气味 云雾状 密度 活率 1ml 白色 无味 ++ 注：云雾状显著以“+++”表示，有云雾状以“++”表示，云雾状不明显以“+”表示。 理化因素对精子的影响记入下表 理化因素对精子活率影响记载表 处理前 活率评分 处理后 活率评分 35-37度 0.7 40-45度 0.8 0-5度 0.2 35-37度 0.6 加入不同浓度溶液前 0.7 加入1%NaCI溶液 0.1 加入3%NaCI溶液 0 加入蒸馏水 0 加入药液前 0.7 加入2%煤酚皂溶液 0 加入1/3000新洁尔灭溶液 0 加入75%酒精 0 （二）精子数量计算和畸形率的测定 实验目的 掌握测定每毫升精液中所含精子数的方法，以及测定精子畸形率的操作要点。 实验材料 1.材料 羊的新鲜精液及冷冻精液。 2.器械 显微镜、载玻片、盖玻片、红细胞稀释管、血细胞记数板、5ml试管、1ml及2ml吸管、玻棒、染色缸、玻片镊、纱布。 3.药品 龙胆紫、酒精、甲醛、 实验内容 1.精子数量测定 血细胞计算板测定法 (1)清洗器械 血细胞计数板及盖玻片用蒸馏水冲洗，使其自然干燥。血细胞稀释管-蒸馏水冲洗-95%酒精清洗-乙醚清洗。 (2)精液的稀释 用红细胞稀释管准确吸取精液至刻度0.5或1处，再准确吸取3%NaCl至101处。（0.5-200倍，1-100倍）用纱布擦去管尖端复着的精液，用拇指按住管口，震荡2-3分钟使其均匀。 (3)精子计数 ①将擦洗干净的计数板置于显微镜载物台上，在计算室上盖上盖玻片。 ②将稀释好的精液，滴一滴于计算室上盖玻片的边缘，使精液自动渗入计算室。注意不要使精液溢出于盖玻片之外，也不可因精液不足而致计算室内有气泡或干燥之处。 ③静置3分钟以400-600倍显微镜检查。 ④统计出计算室的四角及中央共5个中方格即80个小方格内的精子数。 ⑤统计每个小格子内的精子，只数小格子内及压在左线和上线的精子。 ⑥由5个中方格（80个小方格）所统计的精子数（X）代入下列公式即得出每毫升的精子数。 X/80 ×400 ×10 ×稀释倍数 ×1000 = 每毫升精液所含精子数 1.测定精子畸形率 (1)以细玻棒蘸取精液1滴，滴于载玻片一端。以另一载玻片的顶端呈35度角，抵于精液滴上，向另一端拉去，将精液均匀涂抹于载玻片上。于空气中干燥。 (2)固定染色 用0.5%龙胆紫酒精溶液染色3分钟，水洗、侯干即可镜检，也可用蓝墨水染色。 (3)镜检 将制好的抹片置于显微镜下，查数不同视野的500个精子，计算出其中所含的畸形精子数，求出畸形精子百分率。 二、精液冷冻 实验目的 精液冷冻是一种重要的繁殖技术，要求能基本掌握冷冻精液的制作技术。 实验材料 1.材料 新鲜牛精液 2.药品 蔗糖、葡萄糖、柠檬酸钠、甘油、鸡蛋、青霉素、链霉素。 3.仪器 液氮罐 、液氮、水浴锅、量杯、滴管、试管。 实验内容 牛精液冷冻 1.配制稀释液 Ⅰ液——取12%蔗糖8ml和卵黄2ml，青霉素、链霉素各1万单位；Ⅱ液——取Ⅰ液9.3ml加0.7ml。 2.稀释和冷却 取活率为0.8的新鲜牛精液，用等温的Ⅰ液作1：1-2倍稀释，将精液包以10-12层纱布