小鼠巨细胞病毒感染对仔鼠学习记忆能力地影响和其机制研究.pdfVIP

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 素。学习和记忆涉及大脑的内嗅皮层、海马、边缘系统等多钟结构，任一部分损伤 均可造成学习记忆能力损害。而大脑边缘系统尤其是海马在信息整合、储存和传递 过程中起着至关重要的作用，是维持机体正常学习记忆的非常关键的结构。海马的 长时程增强（long-term potentination,LTP ）是学习记忆的神经基础，是突触部位传递 [13] 效能增强的一种现象，是突触可塑性的表现形式 。LIP 的形成包括诱导和维持两个 阶段，Ca2+信号系统及蛋白激酶C （PKC ）系统在这两个阶段中起着重要的作用。 突触前和突触后神经元内Ca2+ 的增高均与LTP 的发生及维持有关。①LTP诱导期 需要Ca2+ 向突触前神经元细胞内内流，促进突触前神经递质释放；②LTP维持期需要 突触后神经元细胞内Ca2+ 引起的多种蛋白激酶激活及其级联反应，从而增强神经递 质、突触素合成；③LTP 的维持还需要Ca2+参与的与记忆有关的基因转录和蛋白质合 成。而PKC是一个复杂的、与Ca2+/磷脂相关的酶系家族。使用特异性抗体标记技术 研究发现，海马是PKC含量最丰富的区域之一，有些与细胞膜结合，有些存在于细 胞浆内。Ca2+浓度升高可以激活PKC β，使底物B250磷酸化，磷酸化的B250加速囊 泡与突触前膜融合，从而促进递质释放。NMDA受体也是PKC 的作用底物，PKC使 NMDA受体亚单位NR1 的C末端磷酸化，从而调节NMDA受体功能。NMDA受体在中 枢神经系统发育过程中，参与神经元迁移、存活及突触连接建立。有学者[14，15]认为， 认知障碍是由于细胞静息态[Ca2+] 过高启动了细胞凋亡机制，引发迟发性神经元坏 i 死；大鼠海马细胞静息态[Ca2+] 过高可能提高了突触传递的阈值、易化突触的抑制、 i 影响突触传导、神经递质释放和信号转导等，从而导致了学习、记忆功能障碍。而PKC 在细胞凋亡中的作用主要是促进细胞的增殖分化，抑制细胞凋亡[16] 。PKC表达降低 影响细胞增值分化，所调控的受体表达下降，可影响正常突触可塑性形成，导致信 息传递和储存障碍，影响学习记忆能力。因此我们推测，海马细胞中Ca2 +及PKC表达 异常可能与CMV感染导致神经系统发育障碍有关。 由于CMV具有严格的种属特异性，建立相应的动物模型是研究HCMV感染致病 机制的重要手段。小鼠巨细胞病毒（murine cytomegalovirus ，MCMV ）的基因结构 及表达产物的功能研究较为全面，且与HCMV具有相似的生物学特性，基因组亦具 有较高的同源性，其生物学特性、致畸性和致病性相似[17] ，其自然宿主近交系小鼠 4 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 具有遗传背景较清楚，妊娠期较短（19～21d ）、价格低廉等优势，这使得采用MCMV 建立小鼠感染模型进行CMV感染机制的研究成为可能。在以往的研究中，我们成功 建立了颅内接种MCMV感染新生小鼠的动物模型，发现MCMV能在颅内活动性复制, [18] 并采用行为学实验证实MCMV感染可导致仔鼠生长发育障碍，学习记忆能力下降 。 在前期实验的基础上，本文重点应用免疫组化及荧光分光光度计法检测海马组 织中的PKC蛋白表达水平及Ca2 +浓度，并观察海马组织形态学改变，从而探讨CMV 感染对子代学习记忆能力的影响及其可能的发生机制。 5 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 参考文献 1. Britt WJ, AlfordCA. In fields Virology[M]. Philadelphis: Lippincott-Rave-en, 1996: 2493-2495. 2. Retiere C,Prod H