嗅鞘细胞对螺旋神经节细胞离体培养的影响和其机制的研究.pdfVIP

中文摘要 第一部分 嗅鞘细胞的体外培养、纯化及鉴定 cells 目的：纯化培养和鉴定成年大鼠嗅球嗅鞘细胞(olfactoryensheathing OECs)，为后续实验做好准备。方法：取成年大鼠嗅球神经层，经酶消化的方法 获得含有OECs的混合细胞悬液，采用多次长时差速贴壁的方法纯化OECs，用 荧光显微镜下观察OECs的形态并统计其纯度。结果：采用多次长时差速贴壁的 方法能够去除绝大部分的污染细胞，包括成纤维细胞和星形胶质细胞，接种的 OECs约24小时后贴壁，倒置相差显微镜下观察见大部分细胞胞体呈梭形、部 分细胞胞体为多角形，伸出突起；细胞在接种培养的前2d生长缓慢，2d后培养 约92％的细胞为P75sTR(+)，分布在突起、胞体，其中胞核被深染；约12％ 的细胞为GFAP(+)。结论：采用多次长时差速贴壁的方法能够获得实验所需 能够显著促进OECs的增殖。 关键词： 嗅鞘细胞；培养；免疫荧光化学染色 第二部分 嗅鞘细胞对耳蜗螺旋神经节细胞离体培养的影响 目的：探索在离体实验中OECs有无促进耳蜗听觉传入神经元一螺旋神经节 cells 细胞(spiralganglionSGCs)存活的作用。方法：取成年大鼠嗅球和新生大鼠 蜗轴组织块进行OECs与SGCs的培养，采用多次长时差速贴壁的方法纯化培养 培养组和SGCs单独培养组。倒置相差显微镜下观察OECs和SGCs生长状态， 果：OECs贴壁培养7天后形成一细胞单层，在OECs与SGCs共培养体系中， SGCs在OECs形成的细胞单层的表面生长，并伸出长突起，呈现典型的双极神经 2 元形态；在培养的前6d，随着培养时间的延长，SGCs较接种前减少，但共培养 中培养比较，共培养组更能促进SGCs存活，并且单独培养组的SGCs数量在培 养的第6d出现大幅度减少；在培养的第9d，单独培养组中几乎没有SGCs生长； 而在共培养组，SGCs的数量未见明显变化(PO．05)；统计发现单独培养组中存 SGCs／ 活的SGCs由第3d的14．6士1．1SGCs／视野(x200)减少到第14d的3．3+0．3 视野；0EC-CM组中的SGCs由35．3士2．1 S6Cs／视野下降到12．9-3：0．3SGCs／视野；共 培养组中存活的SGCs较其它组明显增多，由第3d的66．9-3：1．2SGCs／视野(× 200)减少到第14d的38．9d：1．0 促进新生大鼠SGCs存活。 关键词：嗅鞘细胞；螺旋神经节细胞：培养；存活 第三部分 嗅鞘细胞促进螺旋神经节细胞存活的分子机制 目的：初步研究OECs促进SGCs体外存活的分子机制。方法：建立OECs 与SGCs共培养体系，实验分三组：共培养+脑源性神经营养因子(BDNF，500 ug／m1)组：对照组为OECs与SGCs pg／m1)组：共培养+BDNF抗体(IgY型，50 生长，但与对照组比较，SCG的数目无统计学差异；加入BDNF抗体(19Y)的共 养保护作用的分子机制之一。 关键词：嗅鞘细胞；螺旋神经节细胞；培养；脑源性神经营养因子；存活 3 and of cells Part1 identification olfactory Culture，purification ensheathing cultureand olfactoryensheathing Objective：To purify nerve ofad