周围神经Wallerian变性对干细胞归巢迁移的动员作用和趋化性再生的潜在分子机制.pdf

中文摘要 中文摘要 目的在建立大鼠周围神经损伤模型的基础上，研究Wallerian变性与干细胞 归巢之间的关系，周围神经损伤后干细胞向神经断端归巢的现象及潜在机制， 以及干细胞归巢后的转归，为周围神经损伤的修复探索新的思路。利用蛋白组 学技术建立感觉神经和运动神经的双向电泳(2．DE)图，比较周围感觉神经和 运动神经内蛋白质的表达差异，为周围神经损伤后趋化性再生的机制研究提供 依据。 方法1．使用PCR，Westernblot，免疫荧光等方法鉴定趋化因子SDF．1在 AMD3100检验SDF．1在其中扮演的角色。 3．通过向大鼠坐骨神经切断／吻合模型的尾静脉注射移植表达RFP的 BMSCs，模拟BMSCs向神经组织归巢的过程，使用荧光成像和病理学方法观察 BMSCs是否通过机体血液循环归巢至损伤的神经组织局部，并进一步使用特异 4．建立大鼠坐骨神经节段性冰冻损伤和CEANA修复节段性缺损两种模型， 部的迁移对神经修复的促进效果并探索其作用机制，重点观察干细胞在神经微 环境中的分化和转归。 5．正常雌性Wistar大鼠，深度麻醉后取双侧隐神经及股神经肌支，打开椎 管及硬脊膜，显微镜下分离取出背侧神经根及腹侧神经根，分别提取蛋白质。 在蛋白质充分匀浆、超声裂解并定量后，在相同条件下，对每组蛋白质样品进 行3次双向电泳，对重复3次实验的隐神经与股神经肌支，背侧神经根与腹侧 神经根两两进行分析，比较两对感觉和运动神经电泳图中的蛋白质表达的变化。 中文摘要 将差异表达的蛋白质点从凝胶上切下来并溶解为多肽，使用纳升超高效液相色 谱数据通过Mascot搜索引擎进行蛋白质查询鉴定。 表达RFP的BMSCs中均稳定表达。 100阻断。 BMSCs的迁移，该趋化作用可以被SDF．1／CXCR4轴AMD3 轴阻断剂AMD3100阻断。 4．在节段性冰冻损伤神经或移植的CEANA内部或周围移植RFP．BMSCs 性。在节段性冰冻损伤的神经、桥接节段性神经缺损的CEANA内注射或周围局 部添加BMSCs，可以提高小腿三头肌收缩力和湿重的恢复率，缩短CMAPs潜 伏期，增高CMAPs波幅，增加神经有髓纤维密度以及髓鞘的厚度，促进周围神 经损伤修复。 5．应用双向电泳体系，成功建立周围感觉神经和运动神经蛋白质组双向电 泳图谱，隐神经与股神经肌支，背侧神经根与腹侧神经根等四种神经双向电泳 图蛋白匹配率均80％。通过比较双向电泳图，共计有13个蛋白质斑点在隐神经 与股神经肌支的蛋白质组中差异表达，其中隐神经表达水平较股神经肌支高的 有8个点，股神经肌支较隐神经表达水平高有5个点；共计有16个蛋白质斑点 在腹侧神经根组与背侧神经根组表达差异，其中背侧神经根较腹侧神经根表达 水平高的有6个点，表达水平低的有10个点。将选取的29个蛋白差异点进行 除角蛋白污染后，共成功鉴定隐神经与股神经肌支的11个蛋白差异点(涉及7 种蛋白)，以及腹侧神经根与背侧神经根的9个蛋白差异点(涉及7种蛋白)。 II 中文摘要 中发挥重要作用。 在节段性损伤的神经或桥接节段性神经缺损的CEANA周围局部添加 BMSCs，BMSCs可以迁移到再生神经内，并向神经干细胞及雪旺细胞方向分化， 通过促进髓鞘再生和引导轴索生长，达到与直接向神经内注射BMSCs相当的修 复效果。 成功构建大鼠周围感觉神经与运动神经双向电泳图，并联合使用质谱技术 鉴定了其中的大部分蛋白质。这些蛋白质有可能成为区分感觉和运动神经的特 异性标记，同时可能在周围神经损伤后的趋化性再生过程中发挥重要作用。 关键字归巢，Wallerian变性，间充质干细胞，双向电泳，趋化性再生 NI Abstract Abstract derived OBJECTIVE：Toobservethe