周围神经损伤骨髓间充质干细胞移植的MRI活体示踪研究.pdf

中山大学硕士论文 周围神经损伤骨髓间充质干细胞移植的MR]活体示踪研究 周围神经损伤骨髓间充质干细胞移植的 HRI活体示踪研究 专业名称： 影像医学与核医学 硕士生： 段小慧 指导教师： 梁碧玲教授 中文摘要 研究背景周围神经损伤临床常见，具有高致残性，干细胞移植治疗在周围神经损伤治 疗中前景广阔。干细胞移植后，需要监测移植的细胞的分布及迁移，传统的方法主要为 离体状态下进行组织病理学的分析，MRI具有空间及时间分辨率高，无辐射等优点，可 无创、重复性的对移植干细胞进行活体示踪。目前MRI活体示踪干细胞已广泛应用于脑 缺血、心肌梗塞、脊髓损伤等多种疾病模型中，但是在周围神经损伤干细胞治疗中尚未 见应用。 目的： 1．探讨体外对MSCs进行Gd—DTPA及荧光染料双标记的可行性及安全性。 2．在坐骨神经牵拉伤模型中，探讨MR活体示踪标记MSCs在损伤神经内的分布、迁移、 转归情况及示踪的持久性。 3．探讨MSCs移植能否促进周围神经损伤的修复。 材料方法 1．兔骨髓间充质干细胞的培养与鉴定采用直接贴壁法对兔骨髓MSCs进行分离、纯化 免疫鉴定。 2．兔MSCs体外双标记及安全性检测 用荧光显微镜、电镜观察细胞标记的可行性，体外MRI成像确定最佳标记浓度。标记后， 中山大学硕士论文 周围神经损伤骨髓间充质干细胞移植的MRI活体示踪研究 台盼蓝拒染试验、MTT比色试验、流式细胞术分别检测标记细胞的活力、增殖及调亡情 况。体外MRI成像检测最小标记细胞数目及标记的稳定性。 3．周围神经细胞局部移植及MR活体示踪制备兔坐骨牵拉伤模型，将48只兔分为3 T2弛豫时间及直径，评价细胞移植后神经损伤的修复，观察后肢的外观、坐骨神经功能 检查，动态观察移植细胞的分布、存活及迁徙，并行组织学对照检查。 4．统计学分析标记与未标记细胞台盼蓝拒染率、MTT吸光度的比较采用方差分析，组 内比较采取LSD检验。各段各组之间的T1弛豫时间、T2弛豫时间以及神经直径比较采 用重复测量资料的两因素方差分析模型中多元方差分析。统计学分析使用SPSS 15．0，P0．05认为差异有统计学意义。 结果 1．MSCs体外双标记及检测MSCs双标记后，细胞内可见罗丹明红色荧光，电镜下胞浆 标记细胞，并可持续显示第3代标记细胞。 条状高信号，随时间延长，高信号逐渐减低，神经纤维内信号增高，MRI能够示踪细胞 至移植后7天。荧光显微镜证实移植细胞可由神经外膜向神经纤维内部迁移。 3．MSCs移植后MRI测量 Ⅱ 中山大学硕士论文 周围神经损伤骨髓间充质干细胞移植的MPJ活体示踪研究 =0．565～1．000)。 =0．309)。 4．外观、功能评价及组织学检查 纯移植PBS组恢复快且优。 病理组织上，第2周时，3组均见神经纤维肿胀、崩解，轴突断裂及脱髓鞘，牵拉近 段3组间差异不大，牵拉段及远段，PBS组较标记及未标记MSCs组神经纤维肿胀、崩解， 轴突断裂及脱髓鞘明显，同时均出现少量无髓纤维及有髓神经纤维增生。第6、i0周时， 3组变性及崩解的轴突、髓鞘基本已吸收，再生的神经纤维、雪旺细胞随时间逐渐增多， 牵拉段及牵拉远段标记及未标记MSCs组再生神经纤维、雪旺细胞明显多于PBS组，而 标记及未标记MSCs组之间差别不大；而牵拉近段3组之间无明显差别。 结论 有效， MSCs标记后，既可被MRI检测，又可通过荧光显微镜检测。 间可持续约7天。 3．MSCs移植能促进周围神经损伤的修复，MRI能反映此修复过程。 关键词：磁共振成像；周围神经损伤；间充质干细胞；干细胞移植 Ill 中山大学硕士论文 周围神经损伤骨髓间充质干细胞移植的MR／活体示踪研究 MR invivo stemcells imagingtrackin