吸入布地奈德对哮喘大鼠气道炎症和重塑影响的研究.pdf

■■1●■●1 目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………5 研究论文 吸入布地奈德对哮喘大鼠气道炎症及重塑影响的研究 前言……………………………………………………………………．10一日U吞……………………………………………………………………．1 材料与方法……………………………………………………………11 结果……………………………………………………………………15 附图……………………………………………………………………17 附表……………………………………………………………………24 讨论……………………………………………………………………25 结论……………………………………………………………………．．33 参考文献………………………………………………………………34 综述吸入激素治疗哮喘研究进展………………………………………38 致谢…………………………………………………………………………51 个人简历……………………………………………………………………52 中文摘要 吸入布地奈德对哮喘大鼠气道炎症及重塑影响的研究 摘 要 目的： 支气管哮喘(bronchialastham)是世界医学界公认的四大顽症 之一，被列为十大死亡原因之最。目前，随着人们生活环境的改变，发病 率逐年上升。其临床表现为突然而反复发作的喘息，呼吸困难，胸闷和咳 嗽。气道炎症与气道重塑是支气管哮喘发病的病理基础。本实验通过建立 哮喘模型，观察哮喘大鼠吸入布地奈德后血清中LI．25与IL．12LL值的变化， 探讨哮喘时免疫失衡与NF．r．B表达的动态关系。观察哮喘大鼠吸入布地奈 德后气道NF．r．B，MMP．9表达，探讨哮喘时气道重塑与NF．rd3的关系。 方法： 1动物与药品 Wistar雄性大鼠30只，由河北省实验动物中心提供(实验动物质量 合格证编号：903010)；布地奈德由阿斯利康制药公司生产；免疫组化试 及DAB显色剂购于北京中衫生物技术有限公司。酶联免疫试剂盒购于美 国RB公司；其他实验药品由河北医科大学免疫教研室提供。 2模型制备及实验分组 用随机数字法将30只雄Wistar大鼠随机分为3组：正常对照组、哮 喘模型组、布地奈德治疗组，每组10只。哮喘大鼠模型的制备分致敏和 激发两步。除正常对照组外，其余2组于第1天、第8天、第15天分3 正常对照组用等量的生理盐水进行致敏；第2l天开始将大鼠放入自制的 不完全封闭的有机玻璃箱内，哮喘模型组和布地奈德治疗组予1％卵蛋白 (OVA)溶液用空气压缩泵喷雾激发，每天1次，每次20分钟，连续激 发7天，布地奈德治疗组于激发后，均采用布地奈德雾化吸入治疗，方法 为0．5mg／ml布地奈德加入lml生理盐水中，放入压缩雾化器中雾化吸入， bid。支气管哮喘组激发后以生理盐水雾化吸入，对照组雾化生理盐水作 为对照。上述处理共持续7天。 3 各组大鼠组织标本的制备 中文摘要 各组于末次诱发哮喘后24d,时内麻醉，分离右侧股动脉，留取血标本， 取血清．70℃保存，备做酶联免疫。右肺组织灌入4％多聚甲醛至右肺膨胀， 然后结扎右支气管，固定，取右肺中叶组织，备做免疫组化。 4指标的检测 4．1 IL．12与IL．25的检测 剂说明书进行。 4．2 免疫组化法检测哮喘肺组织中NF．r,B与MMP．9的表达 采用SP900 达，光镜观察，阳性部位呈棕黄色。设定阳性比率，并行统计学处理。 结果： 1哮喘大鼠模型鉴定 模型组大鼠在吸入OVA后不久即出现躁动不安，搔抓颜面皮毛等过 敏症状，继而大鼠俯伏不动，出现呼吸急促，呼吸困难(明显的腹式呼吸)， 部分大鼠可闻及响亮的呼气相喘鸣音，口鼻流出粘液，严重者可出现呼吸 不规则，反复激发后大鼠毛色失去光泽，精神不振和反应迟钝。 2酶联免疫检测结果 2．1血清IL．25水平的变化 1 哮喘组血清IL．25含量是(40．7 含量是(30．43 异，明显高于对照组(25．96