周围神经损伤神经干细胞移植的MRI活体示踪研究.pdf

孛虫大学硪士论文 中文擒娶 周围神经损伤神经干细胞移植的M对活体示踪研究 专 业： 影像医学与核医学 硕士生： 成丽娜 指导教师： 沈君副教授 中文摘要 研究背景 周围神经损伤是临床常见损伤，具有高致残性，其早期、精确诊断有利于提高 疗效，改善患者预后。MPJ是周围神经病交酋选的影像诊断方法。季枣经予缨貔为 神经系统损伤的功能重建及神经修复提供了一条新的途径，利用神经干细胞对中 枢神经系统损伤及病变实行干细胞替代或转基因治疗已成为研究热点。在干细胞 移植中，需要能够实时、活体水平、连续观察移植体内干细胞的分布、分化及转 归的手段。近年来，基于MRI的细胞成像能在活体水平示踪移植受体内的干细胞， 成为干细胞活体监测的较理想的手段。目前在周围神经损伤中，神经干细胞移植 后进行MRI活体示踪的可行性还不暖确。 研究目的 l。探讨NSCs体外e避．DTPA及荧光染料PKH26双标记的可行性及安全性。 2．在坐骨神经牵拉伤模型中，探讨MR活体示踪标记NSCs在损伤神经内的分布、 迁移、转归情况及示踪的持久性。 3．探讨NSCs移植能否促进周围神经损伤的修复及其可能的机制。 材料方法 1．NSCs培养及鉴定 毽廉新谖兰大皇兔孕兔制富取孕16．19d的胎兔，取脑，悬浮细胞培养法分离、 l 孛囊大学硬圭论文 孛文攮要 2．NSCs体外双标记及安全性检测 葡胺(Gd．DTPA)转入NSCs进行双标记。标记后荧光显微镜下观测细胞膜有无 PKH26的红色荧光，电镜下观察细胞内有无高电子密度的Gd颗粒。M尉体外检 测标记效率及标记持久性。台盼蓝拒染实验、MTT实验分别检测标记绷胞的活 光鉴定观察标记对细胞的生物学性状的影响。 3．NSCs周围神经损伤的局部移植及MR活体示踪 制作兔坐骨牵拉伤模型，48只兔，分为3组，在损伤羼1w时分别移植106 下。每组其中9只，进行损伤翦、损伤后l、2、3、4、6、8、10w系列MRI检 查，测量牵拉神经损伤段、损伤近段及损伤远段Tl、瓦弛豫时间及宣径，评价 细胞移植的疗效，并观察损伤肢体的外观，进行坐骨神经功能评价及组织学检查。 每组另7只动物在神经牵拉伤矮1w时局部神经外膜下注射细胞后即刻、3、7、 10、14d，进行系列MRI检查，动态观察移植细胞在神经内的分布及迁徙，并行 组织学对照检查。 4。统计学分析 计量资料以均数士标准差(i虹)表示。标记细胞、未标记细胞的台盼蓝拒染率、 MTT值比较使用重复测量资料的方差分析，TlWI信号强度、Tl弛豫时间之间的 比较馒震璜盒验。采用重复测量资料的方差分析模型中多元方差分析各组各段闻 的Tl、T2值及神经直径有无差别。坐骨神经功能评价指标(踝下垂、展趾反射 及Tarlov评分)做线图，观察随时间变化的趋势。统计学分析使用SPSS13．0软 件，检验水准为P0。05。 结果 l。NSCs分离培养鉴定 NSCs培养呈神经球形态悬浮生长，免疫荧光鉴定Nestin阳性，分化詹NSE 和GFAP阳性。 2．NSCs体外双标记 双标记后，荧光镜下标记细胞膜呈红色荧光，PKH26标记率达100％。电镜下 Ⅱ 中山大学硕士论文 中文摘要 细胞内可见致密的高电子密度的颗粒即为Gd颗粒。标记NSCs在TlWI上信号明 显增高，T1时间缩短，体外M对能检测到的最低标记细胞数目为5x103个。肉 眼可持久观察至第3代标记细胞。NSCs标记后台盼蓝拒染率、MTT吸光度值与未 性。 3．周围神经损伤NSCs移植的MRl检测 牵拉近段：PBS组、未标记NSCs组及标记NSCs移植组神经直径各时间点各组 0．033)。 标记NSCs组与未标记NSCs组两者间无统计学差异(严0．827，0．810)。 牵拉远段：PBS组、未标记NSCs组及标记NSCs移