实验三 齐墩果酸及提取.doc

实验三 齐墩果酸的提取、分离及鉴定 一、实验目的 1、掌握三萜皂苷元的提取、分离和鉴定技术，熟悉三萜皂苷的性质。 2、掌握两相溶剂水解方法。 3、掌握碱溶盐析法提取萜类化合物的方法。 齐墩果酸又名庆四素，属五环三萜类化合物，广泛分布于植物界，已报道其以游离态、酯、苷或兼有的形式存在于150多种植物中，而多数是以苷的形式存在。但含齐墩果酸的量超过10％的甚少。从刺五加、龙牙楤木中提得率超过10％，纯度达95％以上，是理想的药用资源，是一种天然产物化学成分，并己证实其具有多种生物活性。 纯齐墩果酸是白色簇状结晶，无色、无味、无臭，熔点为308-31O℃，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿等有机溶剂。据研究证实，齐墩果酸具有消炎抑菌、增强免疫功能、降转氨酶、改善肝功能，纠正体内异常蛋白代谢，防止肝硬化、降血糖、降血脂等多方面的临床药理作用，它对急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎疗效显著，是国内研制的保肝、治疗肝炎的有效药物之一。此外，齐墩果酸还具有抗血栓形成、抗突变、抗艾滋病、抑制HIV-I的复制作用；以及强心、利尿和抑制S180瘤株生长等作用，其毒性小，副作用低，安全范围大。齐墩果酸还因其有抗衰老、抗突变、清除自由基的作用，还可以作为化妆品成分被广泛应用。 女贞子为木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait．的干燥成熟果实，为常用的扶正固本中药。药理研究表明其促进免疫的主要有效成分为齐墩果酸、熊果酸及乙酰齐墩果酸。齐墩果酸以游离态和结合成苷的形式同存于女贞子中。经检测发现其齐墩果酸含量以幼果期（8月）含量最高，可达8.04％，随着发育成熟下降到2.5％左右。其在果实中的含量分布为外中果皮全果实内果皮种仁。女贞子还含橄榄苦苷、D-甘露醇、硬脂酸、植物蜡等。 女贞子中主要有效成分： （1）齐墩果酸：C30H48O3，白色针状结晶（95％乙醇），mp 305-306℃。可溶于热甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等，不溶于水。 （2）熊果酸：C30H48O3，白色针状结晶（95％乙醇），mp 286-287℃。易溶于二氧六环、吡啶。可溶于热乙醇，微溶于苯、氯仿、乙醚，不溶于水。 （3）乙酰齐墩果酸：C32H50O5，白色簇晶。Mp 258℃-260℃。溶于氯仿、乙醚、无水乙醇，不溶于水。 齐墩果酸 R=H 熊果酸 乙酰齐墩果酸 R=OCOCH3 二、实验原理 根据女贞子中齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用酸水解，氯仿萃取同步法提取齐墩果酸。 根据女贞子齐墩果酸以游离型和结合成苷的形式共存于果实中，采用碱溶解，制备成钠盐形式，酸沉淀方法提取齐墩果酸。 三、实验材料： 500ml圆底烧瓶、烧杯、、管、球形冷凝管、索氏提取器、250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、 2、药品：0g、5%氢氧化钠溶液、浓硫酸、浓盐酸、醇、、氯仿石油醚（沸程60-90）、冰醋酸、乙酸乙酯、氯仿在下，水在上氯仿密度1.4916大 女贞子果皮粗粉 氯仿提取液 回流 回收氯仿至糖浆状 2、分离与精制 方法1：取上述半固状物，以少量石油醚洗涤．除去脂溶性较大的成分，即有固体析出，抽干，得浅黄色析出物。用1:100倍量（W／V）95％乙醇90℃回流10 min，过滤，滤液浓缩至小体积，放置，析出粗晶，抽滤得齐墩果酸粗品。反复用90％乙醇重结晶，可得较纯的齐墩果酸。 即方法1： 半固状物 浅黄色析出物 乙醇回流 齐墩果酸粗品 齐墩果酸 方法2：同方法1用石油醚处理得浅黄色析出物，加10倍量5%氢氧化钠溶液煮沸10 min，放冷后抽滤，适量热水洗涤1～2次，抽干得类白色析出物，用95％乙醇℃回流溶解，趁热过滤，盐酸调至pH l～2，放置析晶。抽滤得齐墩果酸粗品，用正己烷-乙醇（1:1）重结晶，可得较纯的齐墩果酸。 即方法2： 半固状物 浅黄色析出物 氢氧化钠溶液煮沸 乙醇回流 齐墩果酸粗品 齐墩果酸 3、鉴定 a．呈色反应 （1）取本品约50mg，加氯仿2ml溶解后，加硫酸2滴，振摇，静止，氯仿液自无色(或淡黄色)渐变为淡红色。 　　 （2）取本品少量，加乙酸酐lml，微热使溶解，滴加硫酸1滴，即显紫红色，放置后色渐变深。 　　 （3）取本品少量，加香草醛的冰乙酸溶液(香草醛0.5g，加冰乙酸10ml溶解，即得)0.2ml，加高氯酸0.8ml，