氧浓度对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)向软骨细胞分化影响的实验探究.pdfVIP

三．论文 前言…………………………………………………………………………7刖面…………………………………………………………………………7 材料和方法…………………………………………………………………8 结果…………………………………………………………………………10 讨论…………………………………………………………………………13 结论………………………………………·”………………………………14 四、本研究创新性的自我评价…………………………………………………15 五、参考文献……………………………………………………………………16 六、附录 文献综述……………………………………………………………………18 在学期间科研成绩…………………………………………………………25 致谢………………………………··……··…………”…………………26 个人简介……………………………………………………………………27 ·中文论著摘要· 氧浓度对大鼠脂肪干细胞(ADSCs)向]软骨细胞分 化影响的实验研究 目 的 向软骨细胞分化程度的影响。 方 法 原代提取Wistar大鼠的腹股沟及睾丸附近的脂肪组织，剪取附睾脂肪垫， 种至50 IIlL培养瓶中，放入正常C02培养箱中培养，定期换液、传代，观察细胞 形态。记录细胞在不同时期的增值数目并绘制成细胞生长曲线，观察细胞不同 时期的增值情况。将第3代脂肪干细胞以1×105／mL细胞密度接种于24孔培 养板内的无菌盖玻片上，放于C02培养箱中培养，定期换液，待细胞爬片满80％ L， 4。C孵育过夜，后加入二抗，在荧光显微镜下观察细胞表面标志物并照像。脂 肪干细胞向软骨方向定向诱导：取第3代生长良好的脂肪干细胞调整细胞密度 细胞密度接种于96孔培养板内，在酶联免疫检测仪上选择490nm波长比色。免 d 疫组化检测Il型胶表达：分别取5％、10％低氧培养箱和C02培养箱中诱导14 后的细胞爬片，加入一抗、二抗，显微镜观察细胞浆内情况。 结 果 成功的分离Wistar大鼠的腹股沟及睾丸附近脂肪组织，采用不同的培养箱培 养并诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化；细胞生长曲线反应细胞生长的速度及生长 、CD29阳性表达；将第三代细 养14天观察三组细胞的 灰度值数据进行分析，三组数 ；MTT检测5％氧浓度细胞的增 结 论 本试验研究讨论从Wistar大鼠腹股沟及睾丸的脂肪组织中可提取出脂肪干 细胞，在不同的培养条件下诱导分化，最终分化成软骨细胞；5％氧浓度及10％氧浓 出5％氧浓度及10％氧浓度组细胞比20％氧浓度组增殖明显，该实验证明了低氧浓 度的培养条件能够促进脂肪干细胞增殖分化为软骨细胞。为组织工程提供了重要 的种子细胞，同时也为软组织的修复提供了细胞的来源。为软骨修复的组织工程 学研究提供新的科学理念。 关键词 氧浓度； 脂肪干细胞(ADSCs)；软骨细胞；免疫荧光；免疫组化 2 rat