猫爪草总皂苷对人肝癌HepG2细胞活性影响.doc

猫爪草总皂苷对人肝癌HepG2细胞活性影响[摘要] 目的 观察猫爪草总皂苷体外对人肝癌HepG2细胞活性的影响。 方法 采用系统溶剂法提取猫爪草总皂苷，3H-TdR掺入法和集落形成实验观察猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖的影响。 结果 猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖和集落形成均有显著性的抑制作用，呈现较好的量效关系。 结论 猫爪草总皂苷能较好地抑制HepG2细胞增殖。 [关键词] 猫爪草总皂苷；人肝癌HepG2细胞；细胞增殖 [中图分类号] R735.7 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2013）10-0003-03 中药猫爪草（Radix ranunculus ternati）系毛茛科植物小毛茛（Ranunculus Ternatus Thunb）的干燥块根，性温，味甘、辛，入肝、肺经，具有清热解毒、消肿散结、止咳祛痰等功效[1]。临床用于治疗肺结核、淋巴结核、咽喉炎、疟疾等症，对肺癌、肝癌、淋巴癌、甲状腺瘤、乳腺肿瘤等疾病已显示出较好的治疗效果[2，3]。皂苷类广泛存在于植物中，具有广泛的药理活性，包括抗肿瘤、抗炎、抗微生物、抗糖尿病、抗氧化、免疫促进以及心血管和神经保护作用等[4]。 猫爪草总皂苷对肉瘤S180、艾氏腹水瘤EAC、人乳腺癌细胞株MCF-7[5，6]以及人结肠癌LoVo细胞[7-9]的生长有显著性抑制作用。目前尚没有猫爪草皂苷对人肝癌细胞株作用研究的相关报道。本文对猫爪草总皂苷对体外培养的人肝癌HepG2细胞活性的影响进行了研究，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验材料 猫爪草购自浙江省立同德医院中药房，经鉴定为毛茛科植物小毛茛的干燥块根。5-氟尿嘧啶（5-Fu）：天津金耀氨基酸有限公司，批号1105131。 1.1.2 细胞株 人肝癌HepG2细胞，中国科学院细胞库提供，本实验室液氮保存。 1.1.3 主要试剂 RPMI-1640（吉诺生物医药技术有限公司，批；新生牛血清（杭州四季青生物工程材料研究所，批号110304）；0.25%胰蛋白酶（吉诺生物医药技术有限公司，批；氚-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）（中国科学院上海应用物理研究所，浓度1 mci/mL，比度4ci/mM，批号100430）；二甲基亚砜（分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司，批。石油醚、乙酸乙酯、正丁醇均为分析纯。 1.1.4 主要仪器 3165型CO2培养箱（美国Forma公司）；2050型液闪仪（Packard公司）；XS-24型细胞收集仪（浙江绍兴坡圹医疗器械厂）；GS-6R型离心机（Beckman 公司）；HR40-Ⅱ-A2型医用净化工作台（青岛海尔特种电器有限公司）；CK40-F200型倒置显微镜（日本Olympus公司）；细胞培养板（美国Costar公司）。 1.2 方法 1.2.1 猫爪草总皂苷的制备 猫爪草总皂苷的制备参照王爱武等的方法[5]。具体操作如下：称取干燥的猫爪草600 g，粉碎成粗颗粒，用6倍量85%乙醇加热回流提取3次，每次3 h，醇提液回收乙醇，用石油醚萃取3次，再以水饱和的正丁醇萃取3次，正丁醇萃取液用0.1 mol/L NaOH 萃取2次，正丁醇液回收，浓缩至浸膏，置真空干燥箱干燥至无溶剂残留，得总皂苷。实验前用RPMI-1640培养液溶解，过滤除菌，4℃冰箱内保存备用。 1.2.2 细胞形态学观察 倒置显微镜观察经猫爪草总皂苷作用后的细胞形态学改变。 1.2.3 3H-TdR掺入法观察猫爪草总皂苷对HepG2细胞增殖的影响 取对数生长期HepG2细胞配制成1×105/mL细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100 μL，培养24 h后，分别加入不同浓度的猫爪草总皂苷100 μL，使终浓度为6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、200 μg/mL，每一药物浓度做3个复孔，同时设25 μg/mL 的5-氟尿嘧啶（5-FU）对照和10%FCS的1640培养液对照，37℃、5%CO2培养箱培养48 h后分别加入含0.3 μci 3H-TdR的1640培养液50 μL，继续培养16 h，常规收集细胞，测定每个样品每分钟脉冲数（cpm），用三孔的平均cpm值计算出猫爪草总皂苷对HepG2细胞的抑制率。按下列公式计算细胞生长抑制率：细胞生长抑制率=（1-实验组平均cpm值/对照组平均cpm值）×100%。 1.2.4 集落形成实验 取对数生长期HepG2细胞以100个/mL浓度，每孔1 mL接种于24孔板中。37℃、5%CO2培养箱中培养24 h后分别加入不同浓度的受