胃癌中DNA甲基化引起RASSF10表达沉默和临床意义的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· O表达沉默及临床意义 胃癌中DNA甲基化引起RASSFI 的研究 目 的 肿瘤抑制基因的表达沉默在胃癌的发生发展中起重要作用，而DNA甲基化是 肿瘤抑制基因表达沉默的主要原因之一。本文探讨胃癌中RASSFIO基因的表达水 平及与启动子区DNA甲基化的关系，以及DNA甲基化的改变在临床中可能的应用 价值。 材料与方法 一、细胞株和胃癌及对应的癌旁非癌组织 MGC803，AGS，MKN45，HGC27)，胃癌组织和对应的癌旁非癌组织共86对。 二、实时定量RT-PCR 上述7种细胞株培养收获后以TRIzol处理并用氯仿一异丙醇提取RNA，用DNase 分析实时定量PCR数据，以GES-I中的表达量为相对标准，其他6个细胞株中的 表达量与其比较。 三、甲基化特异性P俅 DNA采取经典的有机溶剂法提取，然后行重亚硫酸钠修饰、纯化、回收，回收 的DNA用甲基化特异性引物和非甲基化特异性引物分别行甲基化特异性PCR，对 PCR结果进行电泳分析，判别每一个样本中RASSFIO基因启动子区的DNA甲基化 状态，分非甲基化(U)、部分甲基化(P)、高甲基化(M)三种状态。部分MSP产 物予以测序以判断确切的甲基化状态。 四，药物干预实验 1 以去甲基化药物和／或组蛋白去乙酰化酶抑制剂对MKN45细胞株进行药物干 预，以不加任何一种药物的MKN45作为对照组，其他应用任何一种药物的为实验 照组为相对标准，其他实验组与其比较，用2吣郜‘法分析实时定量PCR数据。 五、统计学分析 将癌组织和癌旁非癌组织中RASSFIO基因的甲基化状态进行统计学分析，癌 组织中RASSFIO基因的甲基化状态与其病理指标行统计学分析，实验数据应用 SPSSl3．0统计软件包建立数据库，进行卡方检验。PO．05时，有显著性差异； PO．05时，无显著性差异。 结果 1、RASSFIO在6株胃癌细胞株中的表达均下调，去甲基化药物和组蛋白去乙 酰化酶抑制剂均可诱导RASSFlO在MI(dq45中的表达，二者联合时诱导作用更强。 株中均为高甲基化。 3、RASSFIO基因的启动子在胃癌组织和相应的癌旁非癌组织中甲基化状态存 VS．≥lOom，56．8％vs． 织中RASSFIO基因的甲基化状态与癌灶大小(lOcm II+BorrmannHIvs． I+Borrmann 91．7％，pO．05)、大体类型(EGc+Borrmann Borrmann N，56．9％VS．85．7％，pO．05)、淋巴结转移(NOVS．NI+N2+N3，40．9％ vs．68．75％，pO．05)、浸润深度(TI+T2 肿瘤分期(I期VS．II期+Ⅲ期，2096VS．67．1％，pO．05)有统计学意义。 结论 RASSFIO基因在胃癌中因启动子区的DNA高甲基化和组蛋白去乙酰化引起表达 沉默，其启动子区的DNA甲基化状态与胃癌的临床病理指标有关，其DNA高甲基 化可作为胃癌恶性进展的一个指标。RASSFIO的生物学功能可能涉及到抑制胃癌 的侵袭和转移，是胃癌中的候选肿瘤抑制基因。 关键词 胃肿瘤；RASSFIO；肿瘤抑制基因：DNA甲基化；表观遗传学 2 ·英文论著摘要· 10 silencedRASSF Theclinical