转座子在耐多产ESBLs大肠埃希菌中的分布性探讨.pdfVIP

目 录 1 转座子在耐多药产 ESBLs 大肠埃希菌中的分布探讨………1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………4 1.3 前言……………………………………………………………8 1.4 材料与方法……………………………………………………9 1.5 结果……………………………………………………………18 1.6 讨论……………………………………………………………27 1.7 结论……………………………………………………………32 1.8 参考文献………………………………………………………33 1.9 英汉缩略词对照表……………………………………………37 2 致谢……………………………………………………………39 3 转座子介导的细菌耐药机制相关研究进展 （综述）………40 转座子在耐多药产ESBLs 大肠埃希菌中的分布性探讨 摘 要 目的：探讨转座子在耐多药产ESBLs 酶大肠埃希菌中的分布及耐药相关 性。方法：1.初筛试验：根据美国国家临床实验室标准委员会（The National Committee for clinical Laboratory Standards, NCCLS ）推荐的纸片扩散法 [1] （kerby-Bauer 纸片扩散法） 检测71 株大肠埃希菌中头孢噻肟（CTX ）、 头孢他啶（CAZ ）、头孢曲松（CS ）、氨曲南（AZT ）的耐药性，即抑菌 环直径≤22 mm 的为头孢他啶；抑菌环直径≤25 mm 的为头孢曲松；抑 菌环直径≤27 mm 的为氨曲南或头孢噻肟；所符合以上标准的定为初筛 [2] 可疑产ESBLs 菌株。2.纸片确认试（Confirmatory tests ） ：对纸片扩散 法所得可疑ESBLs 菌株，同时进行药敏试验，每一组药物中加入头孢他 啶加克拉维酸和头孢他啶、头孢噻肟加克拉维酸和头孢噻肟，观察在加克 拉维酸前后的抑菌环直径变化≥5mm 可确认为产ESBLs 菌株。3.药敏试 [3] 验：采用NCCLS 推荐的纸片扩散法（Kerby-Bauer 法，K-B 法） ，首先 采用对大肠埃希菌标准菌株ATCC 25922 进行质控，再对选定的三类中共 6 种常用抗菌药物：头孢噻肟(CTX)、链霉素(S) 、阿米卡星（A ）、左氧 氟沙星(LEV) 、环丙沙星（CIP)、头孢西丁（F0X ）在71 株大肠埃希菌 耐药性分别进行测定。4. PCR 技术：大肠埃希菌的DNA ，采用Biospin 细菌基因组DNA 试剂盒所提取。根据已知的转座子Tn21、Tn501 、Tnl、 Tn2 、Tn3、Tnl000、Tn1548 分别设计七对引物，在所得到转座子遗传标 记物为阳性的菌株中以大肠埃希菌DNA 为反应模板分别进行PCR 扩增， 阳性扩增长度分别为：Tn21 为317 bp ；Tn501 为373 bp；Tnl 为497bp ； 1 Tn2 为479bp ；Tn3 为323bp ；Tn1000 为372bp ；Tn1548 为497bp ；将扩 增产物进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线检测仪观察结果。5.基因测序：分别 提取所测转座子 DNA 扩增阳性的菌株的 PCR 扩增产物用核酸定量仪测 [4] 得 DNA 浓度300ug/ml,并送至上海生工生物技术公司进行基因测序 。 结果：1.产ESBLs 菌株：在71 株大肠埃希菌中通过纸片法初筛后再行确 认试验，共检出产ESBLs 34 株（49.30 ％）。2.药敏结果：6 种抗生素的