金属硫蛋白-3基因转染对食管癌细胞株增殖活性的作用.pdfVIP

●●■1】 屯， 。 |flll l I II IIII f rll ri llI ＼1779957 ．．． ．．． ．．． ．．． ．．． ．．． ．．． ．．． ．．． ．．． 1 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4 细胞株增殖活性的影响 前言日lJ舌 …………………………………………………………………芍…………………………………………………………………8 材料与方法 …………………………………………………………9 结果 …………………………………………………………………14 附图 …………………………………………………………………16 附表…………………………………………………………………2l 讨论…………………………………………………………………22 结论 …………………………………………………………………26 参考文献………………………………………………………………27 综述 细胞转染与脂质体转染技术的研究进展………………………32 致谢………………………………………………………………………40 个人简历 …………………………………………………………………41 中英文对照及部分简写 金属硫蛋白 metallothionein．MT 金属硫蛋白-3 MT-3 金属硫蛋白．1 MT-l 胎牛血清 FBS 四甲基偶氮唑蓝 MTT 二甲基亚砜 DMSo 磷酸盐缓冲液 phosphate-buffered 脂质体2000 Lipofectamine2000 中文摘要 金属硫蛋白．3基因转染对食管癌细胞株增殖活性的影响 摘要 目的：食管癌是人类常见的恶性肿瘤。中国男、女平均死亡率分别为 乏维生素、亚硝酸盐含量增高以及食物霉菌污染等可能与食管癌发生有 关。随着分子生物学的发展，发现食管癌的发生发展涉及到多个基因的改 变，是癌基因的激活与抑癌基因失活长期协同作用的结果。因此深入研究 食管癌的发病机制，以有效地对其进行预防和治疗有着非常重要的意义。 MT是一类广泛分布于生物体体内的低分子量、富含半胱氨酸的蛋白质， 在维持金属离子内稳态、重金属的解毒、清除自由基等方面具有重要作用。 对于其他金属硫蛋白，MT．3具有特异结构和特异生物学功能，是神经系 统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白质。为了研究金属硫 对食管癌细胞行为的影响，从而确定MT-3在食管癌中发挥的作用。 方法： 中进行培养至细胞生长达80％后，准备进行转染。 MTl三种质粒的大肠杆菌菌株，摇菌，过夜培养，提取高纯度的质粒，．70 ℃保存，待行转染。 3分别配帛0 MTl三种质粒DN～脂质体复合物，将以上质粒DN～脂质体复合物与两 光显微镜下观察真核表达质粒中荧光蛋白在细胞内表达情况，并计算细胞 转染效率，以确定该三种真核表达质粒在细胞内最佳转染时间。 4同法将以上三种质粒与两种细胞株分别在九十六孔板内行瞬时转染，设 中文摘要 六复孔，各复孔重复上述操作，每组重复三次，然后选择490nm的波