散斑照明宽场荧光层显微成像技术研究！.PDFVIP

第 卷 第 期 年 月 物 理 学 报 $/ ! % ! ， ， ， JK7 *$/ IK * ! ,@4LM % （ ） !3()C%C$/ ! C/’-!3) D+1D E.FGH+D GHIH+D !% +N6A * ENO * GK@ * 散斑照明宽场荧光层析显微成像技术研究! ）） ） ） ） ） ） ! ! ! # ! ! 林浩铭 邵永红 屈军乐 尹 君 陈思平 牛憨笨 !）（深圳大学光电子学研究所，光电子器件与系统教育部重点实验室，深圳 $!%’ ） ）（深圳大学生物医学工程重点实验室，深圳 $!%’ ） （ 年 月 日收到； 年 月 日收到修改稿） % ( ( % % ) 介绍了一种新的宽场荧光层析显微方法 在传统宽场显微镜中引入散斑图案照明样品，控制散斑图案的动态 * 变化，利用 相机记录对应的一系列荧光图像 由于焦平面内强度变化远比焦平面外强度变化剧烈，通过合适的 ++, * 算法能够获得焦平面的层析分辨的荧光显微图像 标定了系统参数，并研究了不同的图像重建算法对系统性能的 * 影响，获得了不同生物组织样品的层析图像* 实验表明，该显微方法能用于组织光学切片成像，在临床医学中具有 实际应用价值* 关键词：荧光，散斑照明，荧光显微，层析 ： ， !## -$. -( !B 引 言 B 理论基础 ［，］ ! 当激光束照射到物体上时，会在自由空间产生 激光扫描共焦显微镜 是一种性能良好的光 学显微成像工具，在生命科学研究中获得了广泛的 散射光* 物体表面的每一个物点都可视为一个子波 应用* 与普通的宽场荧光显微方法相比，共焦荧光显 源，由于激光束存在高相干性，因而由每一个物点散 微的优点在于能获得一定厚度样品的三维层析图 射的光将和其他物点散射的光发生干涉* 因为物体 ［］ 表面上各个面元是随机分布的（这种随机性由表面 像，可提供较高的时间和空间分辨率( * 但是这种显 粗糙度引起），由它们散射的各个子波的振幅和相位 微方法需要对一个或多个照明点进行扫描，需要三 都不相同，并且是无规则分布，所以由各面元散射的 维扫描系统，从而使系统更加复杂且成像速度较慢* 子波相干叠加形成的反射光场具有随机的空间光强 为了提高成像速度，人们还提出了非扫描的显微 分布* 当把探测器置于光场中，在探测器接收面上能 ［