肿瘤生物学国家重点实验室资料.docVIP

肿瘤生物学国家重点实验室 实验室于2006 年被评为肿瘤生物学国家重点实验室。实验室总面积3300平方米，设备总值 700 万元。实验室设组织细胞培养和病毒载体包装单元、蛋白质功能学、Q-PCR单元、流式细胞仪和基因操作分子克隆单元功能单元。主要研究方向为（1）消化道道肿瘤的发病机制和转移机制（2）胃癌肝癌诊断的早期预警研究；（3）慢性肝病的干细胞治疗和胆汁性肝淤积发病机制研究。实验室专职研究人员3名，其中正高2名、中级1名。在国家211工程经费资助下近年来实验室新进购置了大量先进仪器，拥有美国BD公司流式细胞仪1台、Roache 公司和MJ公司荧光定量PCR仪各1台、Bio-rad凝胶电泳分析仪、SORVA高速低温离心机、forma细胞培养箱台，荧光显微镜--正置、倒置--各1台及照相系统一套（OLYMPUS）具体位置：西京消化病医院16楼 ? 单元简介：病毒载体系统（包括腺病毒载体、逆转录病毒载体、慢病毒载体）已经成为介导基因对哺乳动物细胞转染的重要手段。与质粒DNA载体相比，病毒载体系统转染效率高、目的基因表达效率高，表达水平稳定等优点。可提供：细胞的常规培养，重组病毒载体的包装制备，重组病毒载体的包装，病毒颗粒的收集，滴度的测定，病毒载体对目的细胞的感染，倒置显微镜下摄像等服务。 开放实验项目： ? 1. 细胞的常规培养 项目说明：本实验室拥有的主要设备：SterilGARD Advanve生物安全柜2台，超净工作台6台，forma细胞培养箱6台，普通倒置显微镜3台，荧光显微镜--正置、倒置--各1台及照相系统一套（OLYMPUS），低温离心机1台及相应的配套设备。细胞培养室24小时开放，定期定时室内消毒灭菌。可进行细胞的原代培养，复苏与冻存，常规培养等。 收费标准：每人每天15元（院内），20元（院外） 联系方式：乔泰东 电话 ? 2. 重组病毒载体的包装制备 项目说明：病毒载体携带的外源基因的表达往往会有一定的细胞毒性，甚至有时没有细胞毒性的基因的中度水平的表达也会明显阻碍病毒载体的复制和扩增。通过对病毒载体的重组，转录并包装RNA 到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白，利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装。我们拥有丰富的腺病毒及慢病毒等的重组改装经验，能根据需要包装制备不通的病毒载体。 收费标准： 500元/病毒株（院内），700元（院外） 联系方式：乔泰东 电话 ? 3. 病毒颗粒的收集 项目说明：通过表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，通过低温高速离心后，除去细胞碎片。滤器过滤，再次离心，反复2次，得到病毒浓缩液。分装、-80保存。我们技术成熟，病毒浓缩液的滴度可达到1010TU/mL。能高效的进行感染及治疗。 收费标准： 200元/病毒株、（院内），250元（院外） 联系方式：乔泰东 电话 ? 4．病毒滴度的测定 项目说明：通过倍比稀释法将不同浓度梯度的病毒原液或病毒浓缩液感染293细胞，4 天后，观察荧光表达情况。荧光细胞数随稀释倍数的增加而减少。采用GFP荧光FACS计数法来检测病毒的滴度。该方法操作简单，重复性好，是理想的检测方法。 收费标准： 100元/病毒株（院内），140元（院外） 联系方式：乔泰东 电话 ? 5．病毒载体对目的细胞的感染 项目说明：病毒载体具有感染的宿主细胞范围广，感染效率高，不仅可以感染正在分化的细胞，也可以感染静止及非分裂的细胞，能高效地将目的基因转导入体内和体外培养的细胞中去等优点。对于难感染的细胞，加入适当浓度的polybrene，可提高病毒感染效率2-8倍，提高MOI值，降低病毒用量。 收费标准： 400元/细胞系（院内），200元（院外） 联系方式：乔泰东 电话 ? 6．病毒感染细胞的筛选与培养 项目说明：病毒载体感染细胞24~48小时后，可检测目的基因的表达及开始筛选。通过病毒载体的抗性表达，选择合适的药物进行加压筛选，10~12天后可获得稳定表达目的蛋白的细胞克隆。获得稳定表达目的蛋白的细胞株后，可冻存或直接扩大培养用于体内体外实验。 收费标准：每人每天160元（院内），200元（院外） 联系方式：乔泰东 电话7. 成套服务：2000元/病毒株 ? 7．倒置显微镜下摄像 项目说明：本实验室拥有的倒置荧光显微镜，由倒置显微镜和落射荧光显微镜组成，仪器配有长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜，倒置观察时配置长工作距离平场相衬物镜和带相衬装置的特长工作距离聚光镜，荧光观察时可进行激发滤色片组切换，具有成像清晰，视场广阔，结构紧凑，造型美观，操作舒适等特点，