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DNA指纹术的工作原理及步骤 提取DNA (样品:毛发、血痕、精斑、人体组织或白骨等) 用限制性内切酶HinfI切割，将DNA切割成许多长度不同的小片段。 对酶解完全后的DNA片段进行电泳，分离各酶切片段。 先用碱性溶液使凝胶板中双链DNA片段变性为单链片段，然后将凝胶板夹在尼龙膜中，使这些单链DNA片段转印到尼龙膜上。 让放射性核心序列探针与尼龙膜上的单链DNA片段进行分子杂交。 用放射性胶片与尼龙薄膜叠放，尼龙膜上的放射性探针便会发出X 射线使胶片曝光，从而使杂交带显影在胶片上。 获得DNA片段条状图谱,便是所谓的DNA指纹。 DNA指纹技术的原理：P457 An application of repeated DNA sequences found in mammalian genomes Highly variable between individuals No two people are the same, except identical twins 1 ．高度的特异性 2 ． 稳定的遗传性： DNA 是人的遗传物质，其特征是由父母遗传的。分析发现， DNA 指纹图谱中几乎每一条带纹都能在其双亲之一的图谱中找到，这种带纹符合经典的孟德尔遗传规律，即双方的特征平均传递 50 ％ 给子代。 3 ． 体细胞稳定性：即同一个人的不同组织如血液、 肌肉、毛发、精液等产生的 DNA 指纹图形完全一致。 DNA 指纹的特点 * 早期诊断：基因诊断不仅可对有表型出现的疾 病作出明确诊断，它还可在产前早期 诊断遗传性疾病，可检出感染疾病潜 伏期的病原微生物、还可预测和早期 发现某些恶性肿瘤。 第十四章 基因诊断与基因治疗 表型的改变是由基因异常造成的 表型的改变是由基因异常造成的 讲授内容及要求 一、基因诊断的基本概念 二、基因诊断的基本技术 三、基因诊断的应用 四、基因治疗:概念、方式、 程序、应用 第一节 基因诊断基本概念与流程 传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为依据，如患者的症状、血尿各项指标的变化，或物理检查的异常结果，然而表型的改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生的一定时间后才出现，因此常不能及时作出明确的诊断 表型的改变是由基因异常造成的 基因的改变是引起疾病的根本原因 传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为依据，如患者的症状、血尿各项指标的变化，或物理检查的异常结果，然而表型的改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生的一定时间后才出现，因此常不能及时作出明确的诊断 一.概念 基因诊断：应用分子生物学技术,从DNA/RNA水平检测分析致病基因的存在,变异与表达状态从而对疾病作出诊断的技术 DNA诊断 RNA诊断 基因诊断是病因的诊断，既特异又灵敏，可以揭示尚未出现症状时与疾病相关的基因状态，从而可以对表型正常的携带者及某种疾病的易感者作出诊断与预测，特别对确定有遗传疾病家族史的个体或产前的胎儿是否携带致病基因的检测具有指导意义 二、基因诊断的特点 针对性强： 以探测疾病基因为目标，属于“病因诊断” 。 特异性高： 以分子杂交技术为基本原理 灵敏度高： 基因探针带有十分敏感的检测标记，可从人 类长达3×106kb的基因组中检测出某一基因的 单碱基改变。而且待测标本微量。 早期诊断：基因诊断不仅可对有表型出现的疾 病作出明确诊断，它还可在产前早期 诊断遗传性疾病，可检出感染疾病潜 伏期的病原微生物、还可预测与早期 发现某些恶性肿瘤。 适应性强： 基因探针可为任何来源，任何种类，探针序 列可为已知亦可未知，检测目标可为内源基 因