第二节 细菌及遗传分析.pptVIP

第二节 细菌的遗传分析 一、转化 二、接合（杂交） 三、性导 四、转导 一、转化（Transformation） 细菌通过细胞膜摄取周围环境中DNA片段，并通过重组将其整合到自身染色体中的过程，称为转化。  当外源DNA进入宿主后，使宿主产生新的表现型时就能测知转化的发生。 关于转化,将在遗传的分子基础中讲解。 二、接合（conjugation） 在原核生物中，两个细胞在相互接触过程中，遗传物质从一个个体转移到另一个个体的现象称为接合。 输出遗传物质的个体称为供体（donor），又称为“雄性”。接受外源遗传物质的个体称为受体（receptor），又称为雌性。 E.coli（大肠杆菌）是遗传学研究中应用最为广泛的细菌。野生型的E.coli可以在只含有盐类和葡萄糖的简单培养基上生长。 （一）杂交实验 1946年，Leaderberg和Tatum发现E.coli可以通过接合交换遗传物质。选用两个不同营养缺陷型的E.coli菌株，A和B。A菌株需要在基本培养基中补充甲硫氨酸（met）和生物素（bio） ，B菌株需要在基本营养培养基上补充苏氨酸（thr）和亮氨酸（leu）才能生长。采用多营养缺陷型是为了防止回复突变干扰试验结果。 黎德伯格和塔特姆接合试验 A和B均不能在基本培养基上生长，但若将A和B在完全液体培养基上培养几个小时以后再涂布在基本培养基上，就能长出一些原养型（met+bio+thr+leu+）的菌落。细菌的野生型又称为原养型。 这种原养型菌落的出现是由于营养上的互补，还是由于两种不同类型细胞直接接触而交换了遗传物质的结果呢？ U型管试验 1950年，Davis设计了一种U型管试验。 试验说明：两个菌株间的直接接触是原养型细菌出现的必要条件。 （二）F因子 1952年，Hages通过实验证明，在结合过程中，遗传物质的转移是单向的。一个菌株（如A菌株）是供体，而另一菌株（如B菌株）是受体。 A菌株之所以能成为供体，是因为它含有一个性因子（sex factor）又称致育因子（fertility factor），简称F因子。 携带F因子的菌株称为供体菌或雄性，用F+表示。没有F因子的菌体称为受体菌或雌性，用F－表示。 （二）F因子 F因子是一个小型的双链环状DNA分子，是染色体外遗传物质，是质粒的一种，在分类学上属于附加体（episome）。 它既能以自主状态存在于细胞质中，又能整合到细菌的染色体内。F小环与主染色体大环之间发生一次交换就可以插入到宿主染色体中。F因子整合到E.coli染色体上以后，该菌株就成为高频重组株（High frequence recombination ,Hfr），以Hfr表示。 （二）F因子 F因子处于自主状态时，可以不依赖宿主细胞的染色体而独立复制（每个F+细胞只有一个F因子）。据研究，F因子至少包含有15个基因，其中有的基因控制F（或性）伞毛（F pillus）的形成，F伞毛是F+细胞表面伸出的一种长附属物。F+与F+之间互不理睬，但F+和F－一旦相互接触，F伞毛就变成了两个细胞之间原生质的通道，叫做结合管（conjugation tube）。F+细胞中的F因子由结合管向F－传递，使F－变成F+。 F 因子及其在杂交中的行为 （三）高频重组 高频重组菌株（Hfr）与F－杂交时，重组频率很高，而F－很少转变为F+。 后来发现， Hfr中F因子整合到细菌染色体上了。 （三）高频重组 在Hfr中，F因子的复制是与宿主染色体同步进行的。当Hfr×F－时，Hfr细胞可以把部分甚至全部染色体传递给F －受体，而且当供体和受体带有不同的标记基因时，相互之间的重组频率很高，故而被称为Hfr（High frequence recombination）。 （三）高频重组 （四）细菌的交换过程 当Hfr菌的部分染色体进入F－后，F－细胞中就有一段DNA具有2份拷贝，被称为部分二倍体（partial diploid）或部分合子（mero zygote）。新转入的DNA片断称为供体外基因子（exogenote），而受体的染色体称为受体内基因子（endogenote）。 （四）细菌的交换过程 外基因子和内基因子可以发生交换而产生基因重组。部分二倍体中，若发生单数交换是没有意义的，因为单交换使环状的内基因子打开成为线性DNA，这种细胞是不能成活的。发生偶数次交换才能产生可遗传的重组体（recombinant）和一个片断（fragment）。片断以后为酶所降解。 （四）细菌的交换过程 这样，重组后的F－细菌不再是部分二倍体，而是单倍体，得到的重组体的类型只有一个，而不是两个，相反的重组体是不能存活的（例如有＋＋，没有――）